Реактивы для проведения анализов крови

Реактивы для проведения анализов крови

  1. Правильная подготовка к сдаче анализов крови
  2. Сдача крови на анализ
  3. Самостоятельное проведение экспресс-теста
  4. Виды анализа на холестерин
  5. Расшифровка результатов анализа
  6. Что лучше есть перед сдачей крови на анализ

Для снижения холестерина наши читатели успешно используют Aterol. Видя, такую популярность этого средства мы решили предложить его и вашему вниманию.
Подробнее здесь…

Чтобы диагностировать атеросклероз и вовремя выявить риск развития инсультов и инфарктов, необходимо сделать анализ на холестерин. Для этого кровь отбирается из вены, причем делается это натощак.

Далее рассмотрим, как специалисты рекомендуют готовиться к сдаче анализов, как правильно сдавать кровь, какие анализы будут проводиться, а также о чем будут говорить их результаты.

Обычно вся подготовка перед тем, как сдавать кровь на холестерин, заключается в воздерживании от принятия пищи в течении минимум восьми часов.

Обычно полным людям врачи рекомендуют не употреблять за два дня до анализов любую жирную пищу. Это способствует более качественной подготовке.

Существуют утвержденные правила, которые по пунктам расписывают, как подготовиться к сдаче крови на холестерин:

  • Прием пищи проводится за 12-16 часов перед посещением медицинского учреждения. Более длительное голодание может привести к ослаблению организма, вследствие чего результаты лабораторного теста окажутся недостоверными.
  • Минимум сутки перед проведением исследования нельзя употреблять алкоголь, а за 1,5-2 часа также не рекомендуется курить.
  • Перед сдачей крови можно пить только негазированную воду без сахара, хотя и это также нежелательно. По возможности ограничьтесь стаканом очищенной воды.
  • Если употребляются медицинские препараты, об этом обязательно предупреждается врач, дающий направление на проведение исследования. В этом случае отменяется прием лекарственных средств, влияющих на содержание холестерина (витамины, мочегонные средства, антибиотики, гормональные препараты и другие).
  • Уровень холестерина у женщин репродуктивного возраста находится вне зависимости от менструального цикла, поэтому от специализированного исследования не следует отказываться даже в ходе месячных.

Иногда, напротив, специалисты требуют от пациентов вообще специально не готовиться к сдаче крови. Это нужно, если будет проводиться определение среднего показателя.

Только в специализированных лабораториях медицинских учреждений может быть проведен анализ на холестерин. Как сдавать кровь, непосредственно на месте объяснит сотрудник лаборатории, а от самого пациента лишь требуется правильно подготовиться к процедуре и прийти утром в медучреждение.

Непосредственно перед сдачей рекомендуется минут 10-15 посидеть и расслабиться. Сразу после быстрой ходьбы или, например, подъема на несколько этажей по лестнице процедуру начинать нельзя.

С высокой точностью самостоятельно анализ крови на холестерин провести не удастся, так как универсальных приборов для этого еще не существует. Такой процесс проводится исключительно в специализированной лаборатории по специальным схемам с использованием высокочувствительных реактивов.

Тем не менее для пациентов, которым показана гиполипидемическая терапия, существует специальный экспресс-метод диагностики при помощи электронного экспресс-анализатора с тестовыми одноразовыми полосками или же экспресс-теста, тоже одноразового.

С их помощью можно получить представление об эффективности лечения дома, не посещая врача.

Для проведения экспресс-теста следует обязательно проводить все подготовительные мероприятия, связанные с ограничением приема пищи, алкоголя и т. д.

Удобство метода заключается не только в отсутствии необходимости посещения лаборатории, но и в быстрых результатах диагностики — сделать вывод о примерном содержании холестерина можно уже через пять минут, в то время, как заключение медицинским учреждением выдается только через 1-3 суток.

Приборы для экспресс-тестов используются по типу глюкометра:

  1. На специальную тест-полоску в аппарате помещается капля крови пациента;
  2. Через примерно три минуты на дисплее появится цифра, которая и будет результатом анализа общего содержания холестерина в крови.

Подобные исследования крови у здоровых людей проводятся обычно раз в год. Пациентам же с повышенным фактором риска развития сердечно-сосудистых заболеваний проверку следует проводить чаще, в т. ч. с использованием описанного портативного прибора.

Всегда для оценки состояния здоровья в ходе диспансеризации, медобследований и т. д. проводится общий анализ крови, холестерин при котором определяется наряду с другими важнейшими показателями.

Если выявляется его превышение (более 5,2 ммоль/л), то это служит основанием для проведения более развернутого исследования, называемого липидограммой.

Наиболее точно об опасности развития атеросклероза можно судить, проведя т. н. развернутый анализ крови на холестерин. Он представляет собой расширенное исследование (липидограмму), которая определяет не только содержание общего холестерина, но и его фракций, триглицеридов и коэффициента атерогенности.

Холестерин, а точнее его фракции в результатах развернутого анализа обозначаются как:

  • ЛПВП или альфа-холестерин (липопротеид с высокой плотностью). Он представляет собой «полезный» вид холестерина, который не откладывается в сосудах, а напрямую транспортируется в печень. Нормальные показатели ЛПВП должны превышать 1 ммоль/л.
  • ЛПНП или бета-холестерин (липопротеид с низкой плотностью). Это уже т. н. вредный холестерин, служащий строительным материалом для атеросклеротических бляшек в сосудах. Его содержание в крови должно быть менее 3 ммоль/л.

Еще один важный показатель в результатах исследований — индекс атерогенности, обозначаемый аббревиатурой КА. Он представляет собой соотношение ЛПНП/ЛПВП.

Если значение рассматриваемого коэффициента меньше трех, то человек здоров, а риск поражения сосудов у него минимальный. О имеющемся уже атеросклерозе будет свидетельствовать превышающее 5 единиц значение КА. В этом случае высока вероятность развития ишемического поражения внутренних органов, включая ИБС.

Еще раз отметим, что именно от питания перед проведением исследования во многом будут зависеть его результаты.

Поэтому обязательно нужно знать, как сдать анализ на холестерин правильно, в противном случае вслед за обычным общим анализом необходимо будет провести развернутый, а также и другие исследования, так как превышение или, напротив, недостаточное количество рассматриваемого органического соединения обычно свидетельствует о развитии различных патологий.

Повышенный холестерин встречается у пациентов с ишемической болезнью сердца, а также при сахарном диабете, болезнях почек, ожирении, раке поджелудочной железы, алкоголизме.

Но и низкая концентрация также не является нормой и может говорить о наличии таких заболеваний, как запущенный цирроз, хроническая анемия, а также болезнях костного мозга, имеющихся раковых образованиях и т. п.

Ранее приведенное значение допустимого уровня холестерина на уровне 5 ммоль/л является усредненным, т. к. данный показатель зависит от возраста и более детально определяется по специальной шкале SCORE:

  • Лицам, входящим в низкую группу сердечно-сосудистого риска (без плохой наследственности, молодого возраста) допустимый уровень лежит ниже отметки 5,5 ммоль/л.
  • Для пациентов с умеренным риском (страдающих ожирением, с низкой физической активностью, среднего возраста) допустимым уровнем является 5 ммоль/л.
  • Для лиц из высокой группы риска (гипертоников, с сахарным диабетом, сосудистой патологией) значение должно быть ниже 4,5 ммоль/л.
  • Для людей с очень высоким сердечно-сосудистым риском (инсульт, ИБС, атеросклероз) нормальным уровнем холестерина будет считаться концентрация менее 4-х ммоль/л.

Также нужно учитывать, что нормальные результаты анализов различаются, например, у детей разного возраста и у взрослых, поэтому точно определить необходимость проведения дополнительных исследований и назначить соответствующее лечение может только врач.

Если общий анализ выявил превышение содержания холестерина в крови, необходимо проводить развернутое исследование. Как правильно сдать кровь на холестерин, ранее уже было отмечено.

В данном случае перед проведением развернутого анализа важно как можно более тщательно следовать приведенным рекомендациям, так как на его основе в случае выявления патологии будет назначаться соответствующее лечение.

Такой важнейший показатель, как уровень «плохого» холестерина ЛПНП определяет возможность развития сосудистых патологий. Поэтому на основании его значений с учетом степени сердечно-сосудистого риска врачом назначается (или, напротив, не назначается) лечение с использованием статинов.

Эти препараты, несмотря на эффективность в борьбе с повышенным холестерином, имеют массу противопоказаний, вот почему крайне важно качественно сдать анализ на холестерин. Как сдавать кровь на общее исследование, ранее было подробно описано. Порядок подготовки к сдаче на развернутый анализ ничем не отличается.

Более подробно рассмотрим расшифровку развернутого исследования крови. Помимо определения ранее рассмотренных ЛПВП и ЛПНП («полезного» HDL-холестерина и «вредного» LDL-холестерина) определяется также и уровень триглицеридов.

Последние являются производными жирных кислот и глицерина, т. е. поступающими из пищи в кровь растворенными жирами и не относятся к соединениям холестерина.

Ниже подробно представим нормальные, повышенные и высокие значения концентраций рассмотренных соединений:

мг/л ммоль/л значение
Общий холестерин
Менее 200 5,2 Нормальный
200-239 5,2-6,1 Повышенный
Более 240 6,2 Высокий
ЛПНП («вредный» холестерин), LDL
Менее 100 2,6 Нормальный
100-129 2,6-3,3 Слегка повышенный
130-159 3,4-4,0 Повышенный
160-189 4,1-4,8 Высокий
Более 190 4,9 Очень высокий
ЛПВП («полезный» холестерин), HDL
Менее 40 1 Низкий
Более 60 1,6 Высокий
Триглицериды
Меньше 150 1,7 Нормальный
150-199 1,7-2,2 Повышенный
200-499 2,3-5,7 Высокий
Более 500 5,7 Очень высокий

Особое внимание следует обратить на «хороший» холестерин. Его уровень в отличие от «плохого» ЛПНП определяется максимальным показателем, т. е. чем больше его в организме, тем более защищенными от различных патологий являются ваши сосуды.

Итак, вам требуется сдать кровь на холестерин. Как подготовиться к этому мероприятию, уже было описано. То есть нельзя есть как минимум за 12 часов до сдачи, употреблять алкоголь за сутки и т. д.

Однако если до сдачи анализов есть несколько дней, можно подготовиться получше, выбрав диету, которая поможет максимально подготовить ваш организм.

Для этого полностью исключите из рациона всю жирную, копченую, жареную пищу, выпечки, шоколад и любые сладости, жирные молочные продукты. Старайтесь по возможности употреблять большее количество морепродуктов и овощей.

Больше находитесь на воздухе, совершайте пешие прогулки, увеличьте физическую активность. В этом случае при отсутствии серьезных заболеваний ваш холестерин в крови всегда будет в норме.

Ревмопробы – биохимическое исследование, подразумевающее не один анализ, а целый набор лабораторных тестов, используемых для диагностики аутоиммунных состояний организма.

Отправляя пациента на «ревмопробы», врач, как правило, составляет перечень показателей, интересующих его (что зависит от того, какую патологию подозревает доктор). Это может быть С-реактивный белок (СРБ, СРП, CRP), ревматоидный фактор (РФ), антистрептолизин-О (АСЛ-О, ASO), общий белок, белковые фракции, креатинин и др. Причем, определения «положительные ревмопробы» или «отрицательные результаты» применимы только в отношении СРБ, РФ и АСЛ-О (качественный анализ). Что касается других биохимических показателей (общий протеин, белковые фракции, мочевина, креатинин), то их содержание должно иметь цифровое выражение.

Для снижения холестерина наши читатели успешно используют Aterol. Видя, такую популярность этого средства мы решили предложить его и вашему вниманию.
Подробнее здесь…

Обычно ревмопробы назначают после перенесенной бактериальной или вирусной инфекции, коль есть подозрение, что она могла запустить аутоиммунный процесс, или в случае появления признаков развития хронической воспалительной реакции, обусловленной другими причинами. Итак, поводом сдать анализ крови и сделать ревмопробы можно считать:

  • Иммунновоспалительные болезни почек (гломерулонефрит);
  • Частые ангины (диагноз: хронический тонзиллит);
  • Онкологическая патология различной локализации;
  • Аутоиммунные заболевания (СКВ – системная красная волчанка, РА — ревматоидный артрит).

В подобных случаях анализ крови (ревмопробы) показывает, насколько далеко зашел аутоиммунный процесс, какие изменения в организме он вызвал, как организм откликнулся (или откликается) на проведенные лечебные мероприятия. Отвечая на поставленные вопросы, данное лабораторное исследование помогает врачу правильно оценить степень прогрессирования болезни и состояние пациента, а также дает возможность прогнозировать исход заболевания и эффективность назначенной терапии.

Как указывалось выше, ревмопробы могут включать различные лабораторные показатели:

  • С-реактивный протеин (СРБ, СРП, CRP);
  • Ревматоидный фактор (РФ);
  • Антистрептолизин О (АСЛ-О, ASO);
  • Антитела к циклическому цитрулиновому пептиду (А-ЦЦП, А-ССР, anti-CCP);
  • Общий белок с разделением его на фракции (α, β, γ);
  • Мочевую кислоту (МК), креатинин, мочевину, креатин;
  • Циркулирующие иммунные комплексы (ЦИК);
  • В иных случаях в перечень ревмопроб могут быть добавлены сиаловые кислоты (сиалогликопротеины), занимающие краевое положение в углеводно-белковых комплексах и имеющие склонность к повышению в случае компенсаторных воспалительных реакций, а также серомукоиды (фракция углеводно-белковых комплексов, в состав которых входят протеины «острой фазы), заметно отклоняющиеся от нормы при любых воспалительных процессах.

Отдельные биохимические показатели не всегда присутствуют в списке лабораторного исследования под названием «ревмопробы». Например, общий протеин и белковые фракции интересны, если у пациента предполагаются (или диагностированы) гематологические заболевания, в том числе, злокачественные, миелома, аутоиммунные процессы, тяжелые поражения печени. Тест на мочевую кислоту проводится тогда, когда наличествуют симптомы подагры. А креатин, креатинин и мочевина подтвердят подозрения в отношении развития почечной патологии (или, наоборот, исключат заболевания почек).

Не всегда проводят определение циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК) — показателей формирования воспалительных реакций и активности аутоиммунных процессов, протекающих в организме (ревматизм, коллагенозы, гломерулонефрит, последствия вирусных и бактериальных инфекций). Это связано с некоторыми трудностями: выявление ЦИК не относится к традиционным биохимическим исследованиям, анализ подобного рода находится в компетенции иммунологических лабораторий, которые обеспечены тест-наборами для производства таких анализов и занимаются подобной деятельностью ежедневно. Разумеется, это преимущество имеют клинико-диагностические лаборатории, расположенные в многопрофильных клиниках больших городов.

Нет смысла давать подробную характеристику всем биохимическим показателям, входящим в состав ревмопроб (они перечислены выше), если на нашем сайте их значимость, расшифровка и особенности уже представлены вниманию читателей в соответствующих разделах. Между тем, нельзя еще раз коротко не упомянуть о тех трех факторах, которые признаны главными — СРБ, РФ, АСЛ-О. Правда, в последнее время отдельные лаборатории для диагностики ревматоидного артрита стали использовать четвертый показатель – антитела к циклическому цитрулиновому пептиду (А-ССР), об основных достоинствах которого читатель также сможет узнать в данной статье. При всем этом, следует заметить, что каждый из тестов, хоть и хорош по-своему, но может не давать полной картины происходящего, поэтому врачи не назначают их по отдельности (только СРБ или только АСЛО…). Как правило, они (с расшифровкой каждого) идут все вместе под одним названием – ревмопробы, поскольку совместно они помогут не только установить диагноз ревматоидного артрита, но и позволят дифференцировать его (РА) от другой, схожей по клинике, патологии.

Расшифровка данных тестов проста, однако по каждой позиции отдельна, например: РФ (СРБ, АSO) – отрицательно. В случае положительной реакции, нужна отметка о проведении полуколичественного, количественного анализа или титровании с результатом исследования либо о необходимости привлечения дополнительных методов, если сама лаборатория по каким-либо причинам не может их обеспечить. При наличии указания на количественное содержание показателя, чтобы не запутаться в нормах, которые в разных лабораториях могут отличаться, следует узнать референсные значения, принятые в КДЛ, производившей анализ.

Расшифровка других биохимических показателей, которые могут войти в исследование под названием «ревмопробы», приведена в соответствующих темах, размещенных на других страницах сайта.

С-реактивный белок – острофазный протеин в биохимическом анализе крови проявляющийся увеличением фракции гамма-глобулинов, к которым он и относится. Норма в крови — до 5 мг/л .Повышение СРБ, в первую очередь, провоцирует острый воспалительный процесс (в таких случаях данный показатель может увеличивать свои значения в 100 и более раз).

Методика определения СРБ (латексная агглютинация) сложностью не отличается и позволяет получить ответ в самое ближайшее время. Если результаты качественного латекс-теста отрицательные, значит, можно сделать вывод, что с С-реактивным протеином все в порядке. Если же при проведении анализа отмечается положительная ревмопроба, то в тест-наборе имеются реактивы, обеспечивающие дальнейшее проведение исследования (полуколичественный анализ).

СРБ для диагностики острого воспаления имеет особую ценность, ведь этот белок реагирует практически немедленно и повышается раньше других показателей (СОЭ, лейкоциты). Кстати, и в норму он приходит раньше других: процесс затих – результаты отрицательные.

Уже по названию видно, что ревматоидный фактор имеет непосредственное отношение к ревмопробам и определенной патологии – ревматоидному артриту (РА). И в самом деле, ревматоидный фактор (РФ) – главный анализ, выявляющий эту болезнь. Кроме этого, данный лабораторный показатель не лишен способностей «заметить» другие патологические состояния: острый воспалительный процесс любой локализации, системные заболевания. Норма РФ в большинстве лабораторий фиксируется как «отрицательный результат», либо не более 14 МЕ/мл.

Сам по себе РФ представляет совокупность антител (M, A, E, G), где наибольшую часть занимают иммуноглобулины класса М (IgM). Иммуноглобулины М, подвергаясь воздействию инфекционного агента, начинают изменять свои обычные свойства и брать на себя роль аутоантигенов, чем «вводят в заблуждение» собственные иммуноглобулины класса G. Метаморфозы, происходящие с IgM в определенных условиях, легли в основу данного исследования.

РФ, подобно СРБ, можно определить с помощью латекс-теста. Это качественный анализ, который нередко дает ложноположительные ответы, поэтому больше подходит для скрининга, нежели для окончательного установления диагноза. Норма качественного анализа на РФ – отрицательный результат. Однако следует иметь в виду и то, что существует серонегативная форма заболевания (РА), когда результаты отрицательные, а симптомы не оставляют сомнений в развитии воспалительной реакции подобного рода.

При положительной ревмопробе (имеется в виду – РФ) или при подозрении на серонегативную форму заболевания, следует обратиться к другим лабораторным тестам, например, ИФА (иммуноферментный анализ), который позволяет определить не только количественное содержание иммуноглобулинов М в плазме, но и найдет другие антитела, присутствующие в ревматоидном факторе.

Антистептолизины-О представляют собой антитела (АТ), направленные к стрептолизину (так называют антиген бета-гемолитического стрептококка). Норма для взрослых — до 200 Ед/л; для детей до 14 лет — до 150 Ед/л.

Учитывая особую «вредность» гемолитического стрептококка (вторичные инфекции, всевозможные осложнения), тест, определяющий его присутствие в организме, считается весьма значимым лабораторным показателем. Его применяют не только для диагностики патологических состояний, вызванных Streptococcus pyogenes, но и с целью мониторинга развития воспалительного процесса, его прогноза и эффективности лечения. Между тем, следует заметить, что однократное исследование может не дать должной информации, то есть, отрицательные результаты за первым разом не способны успокоить ни врача, ни больного (у 15% пациентов-ревматиков повышение титров АТ может фиксироваться через раз или вовсе не обнаруживаться).

Для определения антистрептолизинов-О и его титров (в набор входит отдельный комплект для титрования) также существует латекс-тест – исследование быстрое и нетрудоемкое, однако некоторые врачи предпочитают проведение анализа крови турбидиметрическим методом, к нему у них больше доверия. Но этот метод (турбидиметрический) уже нуждается в привлечении более сложного оборудования.

Тест на выявление anti-CCP вошел в лабораторную практику, можно сказать, недавно, ведь сами антитела были описаны только в 1998 году. Однако высокая чувствительность и специфичность для РА позволила новому исследованию быстро занять место лучшего маркера ревматоидного артрита. Антитела к циклическому цитрулиновому пептиду взяли на себя ключевую роль в развитии данного патологического состояния. Кроме этого, определение anti-CCP хорошо себя зарекомендовало в вопросах проведения дифференциальной диагностики, прогнозирования течения процесса, разработки стратегии терапевтического воздействия.

Исследование А-ССР проводится с помощью передового иммунохимического метода с электрохемилюминисцентной детекцией (ECLIA). К сожалению, пока не каждая лаборатория может гордиться внедрением новой технологии. Анализ требует участия дорогостоящего оборудования и специальных тест-систем, закупаемых за рубежом, что иным медицинским учреждениям оказывается не по карману.

Норма anti-CCP — «отрицательный результат», до 20 Ед/л.

Шаг 2: после оплаты задайте свой вопрос в форму ниже ↓ Шаг 3: Вы можете дополнительно отблагодарить специалиста еще одним платежом на произвольную сумму ↑

Цоликлоны – это моноклинальные антитела, полученные путем генной инженерии из крови стерильных мышей и применяемые для определения группы крови системы АВО. В отличие от стандартных сывороток, цоликлоны отличаются очень высокой активностью и авидностью, то есть временем наступления и выраженностью реакции агглютинации (склеивания). Основными цоликлонами являются: анти-A, анти-B, анти-AB, анти-0 и другие. По ним определяют группы крови и резус-фактор.

Определение группы крови данным методом проводится в лаборатории. Температура воздуха в помещении должна составлять от +15 до + 25 градусов C. Исследование должно проходить при хорошем освещении. Все реагенты нужно хранить плотно закрытыми, поскольку при высыхании активность антител значительно снижается. Нельзя использовать мутные и содержащие хлопья реагенты. Для каждого из них нужна отдельная пипетка. Процедура проводится на планшете или тарелке белого цвета, поверхность которых должна хорошо смачиваться. Благодаря высокой авидности и активности цоликлонов, есть возможность применения по одной серии анти-A и анти-B реагентов.

На планшете делают надписи: анти-A и анти-B. Под соответствующие надписи капают цоликлоны в количестве примерно 0,1 мл. Реагент анти-A имеет желтовато-розовый цвет, анти-B – синий. Рядом с моноклональными антителами капают по капле крови и смешивают ее с реагентами стеклянной палочкой или уголком предметного стекла. Перед смешиванием следующей пары капель палочку или стекло тщательно промывают и вытирают насухо.

На протяжении 2,5 минут ведут наблюдение за агглютинацией, при этом планшет слегка покачивают. Затем оценивают результат. Надо сказать, что для наблюдения за процессом не требуются никакие приспособления. Агглютинаты хорошо видны невооруженным глазом, они быстро сливаются и образуют большие хлопья. Если склеивания не происходит, капля реагента равномерно окрашивается в красный цвет.

  1. Если агглютинация отсутствует (и с цоликлоном анти-A, и с анти-B), в эритроцитах нет ни антигена A, ни B. Это I группа.
  2. Если агглютинация есть лишь с цоликлоном анти-A, в эритроцитах содержится только антиген A. Это кровь II группы.
  3. Если агглютинация наблюдается лишь с цоликлоном анти-B, в красных клетках есть только антиген B. Это III группа.
  4. Если агглютинация произошла c цоликлоном и анти-A, и анти-B, в эритроцитах есть оба антигена. Для исключения аутоагглютинации проводят контрольную процедуру: смешивают изотонический раствор натрия хлорида (0,1 мл) и исследуемую кровь (0,01 мл). Если агглютинация отсутствует, то это IV группа.

На планшет наносят большую каплю реагента анти-D-супер. Рядом – маленькую (в 10 раз меньше) исследуемой крови, которую смешивают с реагентом и оценивают результат. Если началась агглютинация, кровь является резус-положительной, при отрицательном резус-факторе агглютинации не происходит.

Моноклональные реагенты для определения группы крови имеют явные преимущества по сравнению со стандартными изогем-агглютинирующими сыворотками. Они обеспечивают очень точный результат, а сама процедура безболезненна, безопасна и занимает очень мало времени.

Почему лопаются сосуды в глазах?

источник

2.1. Техника забора крови и подготовки
образца крови для исследования

Шаг А. Подготовка растворов, пробирок и другого инструментария (табл. 1).

Таблица 1. Необходимые подготовительные процедуры при проведении общего анализа крови

Определяемый показатель Посуда Раствор, его объем и состав
СОЭ Химическая пробирка и капилляр Панченкова 5 %-ный раствор C6H5O7Na3∙5H2O набрать в капилляр Панченкова до метки 0,75 и затем выдуть в химическую пробирку
Гемоглобин Химическая пробирка 4 мл трансформирующего раствора (ацетоциангидрин – 0,5 мг, калий железосинеродистый – 0,2 г, натрия гидрокарбонат – 1 г, дистиллированная вода – до 1 л)
Количество эритроцитов Химическая пробирка 4 мл изотонического раствора хлорида натрия
Количество лейкоцитов Химическая пробирка 0,4 мл 3–5 %-ной уксусной кислоты (уксусная кислота разрушает эритроциты, визуализируя тем самым лейкоциты)
Количество тромбоцитов Химическая пробирка 4 мл 1 %-ного раствора оксалата аммония (раствор разрушает эритроциты, визуализируя тромбоциты)

Забор крови из мякоти пальца (капиллярная кровь).

Тщательно протирают кожу мякоти пальца ватным шариком, смоченным спиртом, делают укол стерильным копьем до упора. Первую выступившую каплю крови вытирают сухим ватным шариком; из следующих капель, выступающих из мест укола при легком надавливании, быстро набирают необходимое количество крови: для СОЭ, для определения гемоглобина, для определения числа эритроцитов, для определения числа лейкоцитов, для исследования лейкоцитарной формулы, для определения тромбоцитов.

Забор крови из вены (венозная кровь).

Накладывают жгут на 8–10 см выше локтевого сгиба. Обрабатывают кожу локтевого сгиба над обнаруженной по характерному вздутию вены шариком, смоченным спиртом или другим антисептиком. В вену вводят иглу с подсоединенным шприцем и набирают необходимое для анализа количество крови. Кровь осторожно (не вспенивая, так как при этом происходит разрушение эритроцитов и других клеток крови) выпускают в пробирку с порошком ЭДТА или другим антикоагулянтом. Пробирку закрывают пробкой и тщательно перемешивают кровь для распределения антикоагулянта, опрокидывая пробирку сначала пробкой вниз, затем пробкой вверх. В настоящее время используются специальные системы для забора крови и ее одновременного помещения в одноразовую пластиковую пробирку с антикоагулянтом. Предпочтение исследования венозной крови связано с возможностью одновременного получения объема крови, необходимого для разных анализов.

Шаг В. Внесение крови в подготовленную лабораторную посуду

Кровь вносят в подготовленную посуду специальным капилляром объемом 20 мкл согласно приведенным в табл. 2 разведениям в указанном выше порядке. Набирают ее капилляром до метки 0,02 из мест укола в мякоти пальца или пробирки с венозной кровью, кончик капилляра промокают фильтровальной бумагой, выдувают кровь в соответствующую пробирку и промывают капилляр (путем заполнения капилляра и выдувания раствора) в реактиве той же пробирки для максимально полного внесения образца крови.

Таблица 2. Объемы крови для определения показателей общего анализа крови

Определяемый показатель Объем диагностического раствора Объем крови
СОЭ 1/4 часть капилляра Панченкова (до отметки 0,75), раствор вносится в химическую пробирку Полный капилляр Панченкова до отметки 0, кровь вносится в химическую пробирку с раствором цитрата калия (соотношение кровь : цитрат = 4 : 1)
Гемоглобин 4 мл 0,02 мл
Количество эритроцитов 4 мл 0,02 мл (разведение 1 : 200)
Количество лейкоцитов 0,4 мл 0,02 мл (разведение 1 : 20)
Количество тромбоцитов 4 мл 0,02 мл (разведение 1 : 200)

Затем для последующего определения лейкоцитарной формулы каплю крови наносят на край обезжиренного предметного стекла и быстро готовят тонкий мазок с помощью шлифованного стекла, краем которого быстрым движением продвигают каплю крови по предметному стеклу.

Таким образом, после выполнения шага В для исследования образца крови имеются 4 пробирки со смесью крови и соответствующего реактива и приготовленный тонкий мазок крови на предметном стекле, необходимые для дальнейших диагностических процедур с использованием специального оборудования (табл. 3).

Таблица 3. Оборудование и методы определения основных показателей общего анализа крови

Определяемый показатель Необходимое оборудование Метод
СОЭ Аппарат Панченкова (штатив и капилляры – 1 на каждый образец крови) Седиментационный с последующим визуальным учетом
Гемоглобин Фотоэлектроколориметр Биохимический с ФЭК-учетом результатов
Количество эритроцитов Камера Горяева, световой микроскоп Микроскопический
Количество лейкоцитов Камера Горяева, световой микроскоп Микроскопический
Количество тромбоцитов Камера горяева, световой микроскоп Микроскопический

2.2. Техника определения показателей
общего анализа крови

источник

Забор крови, с последующим её исследованием производился у мужчин в возрасте от 20-ти до 35-ти лет, до и после физической нагрузки. В исследовании приняла участие группа из тридцати трёх человек, каждый из которой, после взятия пробы до физической нагрузки, проходил стандартную тренировку в течение часа. В таблице 3 сведены типы и продолжительность упражнений, которым подвергались все испытуемые.

Таблица 3 — типы физической нагрузки, применяемой в исследовании

Тренировка включала в себя 15 минут бега в нормальном темпе (один тридцатиметровый круг в минуту); выполнение комплекса упражнений (подтягивания, отжимания от пола, приседания) в течение 15 минут в ускоренном темпе (20 подтягиваний в минуту, 50 приседаний в минуту, 30 отжиманий в минуту); 30 минутный спарринг в нормальном темпе (20-25 бросков в минуту). По окончанию тренировки вновь бралась проба такого же объёма, у тех же испытуемых, что и до тренировки.

Основные этапы выполнения общего анализа крови:

2 приготовление мазков крови;

3 проведение анализов на гематологическом анализаторе;

6 подсчёт лейкоцитарной формулы.

Взятие материала. Кровь для исследования получили путём прокола четвёртого пальца левой руки обследуемого слева от срединной линии на некотором расстоянии от ногтя. В зависимости от толщины кожи глубина прокола составляет 2-3 мм. Обработанная кожа пальца высыхает несколько секунд. Цель этого «высыхания» — исключить растекание крови по пальцу, а также гемолитического воздействия антисептика на эритроциты. Скарификатор одноразового использования плотно зажимается между указательным и большим пальцами правой руки; производится прокол. Прокол произвели перпендикулярно рисунку кожных покровов пальца, так как в этом случае происходит повреждение нескольких капилляров, ход которых совпадает с ходом линий кожного рисунка. Учитываем, что разрез произведённый параллельно кожным линиям, спадается, что затрудняет забор крови. Первую, выступившую каплю крови удалили ватным тампоном, а последующие были взяты на исследование. Взятую кровь поместили в пронумерованные и обработанные раствором антикоагулянта. Трилоном-Б, пластиковые микрокюветы. На следующем рисунке показаны одноразовые пластиковые микрокюветы, более удобные и безопасные в использовании, чем стеклянные пробирки.

Все манипуляции связанные с забором крови проводились используя стерильные комплекты инструментов для взятия крови (капилляры Панченкова, предметные стёкла, скарификаторы и микрокюветы). Для каждого обследуемого использовалась индивидуальная пара перчаток и стерильных ватных укладок. Все манипуляции проводились в соответствии с требованиями приказа №165 МЗ РБ от 25.11.2002 г «О методах стерилизации и дезинфекции в медицинских учреждениях» [21].

Рисунок 1 — Микрокюветы с раствором антикоагулянта

Приготовление мазков крови. Для изготовления мазка крови использовались тщательно обезжиренные предметные стёкла. Мазок крови готовился шлифованным стеклом с идеально ровным краем, ширина которого была приблизительно на 2-3 мм уже предметного стекла. К куполу свеже выпущенной из прокола капли было сделано прикосновение предметным стеклом на расстоянии 1,5-2 см от его края, не касаясь кожи в месте прокола. Размер капли на стекле не менее 2-3 мм в диаметре. Шлифованным стеклом, приставленным к предметному под углом 45°, быстрым движением справа налево был сделан мазок. Критерием правильности выполненного мазка является его полупрозрачность и желтоватый цвет. Техника приготовления мазка крови представлена на следующем рисунке.

Рисунок 2 — Техника приготовления мазка крови

Проведение анализов на гематологическом анализаторе. Для исследований использовался гематологический анализатор SISMYX-500. Взятую кровь в миниёмкастях тщательно перемешали и поместили в загрузочную часть аппарата. Предварительно была проведена калибровка данного аппарата, которая заключалась в проведении полного анализа микрокюветы с дистиллированной водой. Определение параметров исследуемой крови протекает в автономном режиме, без непосредственного участия человека. По завершению цикла исследования сняли выданные аппаратом результаты [22].

Изображение аппарата SISMYX-500, и момента отбора пробы для анализа, представлены на рисунке 3.

Фиксация мазков крови. Данный этап предохраняет форменные элементы от содержащейся в красителях воды, под влиянием которой в не фиксированных мазках происходит гемолиз эритроцитов и изменяется морфология лейкоцитов.

Фиксатор также вызывает коагуляцию белков и тем самым закрепляет препарат на стекле. В качестве фиксирующей жидкости использовали раствор эозинметиленового синего по Май-Грюнвальду. Высушенные мазки опускались в широкогорлую банку с фиксатором на 3-5 минут. Далее пинцетом мазки были извлечены и высушены на воздухе.

Рисунок 3 — Гематологический анализатор SISMYX-500

Окраска мазков крови. Фиксированные сухие мазки поместили в контейнер, который опустили в кювету с рабочим раствором красителя и выдержали в нём экспозицию в 30 минут.

Затем, контейнер был перенесён в кювету с водопроводной водой, а затем в вертикальный штатив для сушки. В качестве красящего раствора был использован краситель по прописи Романовского-Гимзы. В состав красителя входят: азур-2 (смесь равных количеств азура-1 и метиленового синего) и эозин. Критериями правильности данной окраски являются розово-оранжевые гранулы эозинофилов, светло-розовый цвет эритроцитов, нейтрофильная зернистость фиолетового цвета.

Подсчёт лейкоцитарной формулы производят с помощью иммерсионной системы микроскопа с увеличением Ч630. Для работы используется специальное иммерсионное масло, каплю которого наносят на препарат. Удобный обзор препарата настраивают с помощью микро- и макровинтов. Для регистрации клеток при подсчёте лейкоцитарной формулы использовался счётчик лабораторный СЛ-1.

Это простейший арифмометр снабжённый клавишами, обозначенными буквами для подсчёта соответствующих видов лейкоцитов, изображён на рисунке 4.

Рисунок 4 — Счётчик лабораторный СЛ-1

Подсчёт лейкоцитов производился в тонкой части мазка, где эритроциты располагаются одиночно. Препарат просматривают по зигзагообразной линии («линии Меандра») в количестве 3-5 полей зрения. Когда сосчитано 100 клеток, счётчик издаёт характерный сигнал, что означает окончание подсчёта лейкограммы данного препарата. Подсчитывались только целые, не разрушенные клетки.

Для оценки влияния физической нагрузки на состояние показателей периферической крови использовались результаты общего анализа крови до и после физической нагрузки.

В ходе исследования нами были вычислены среднее арифметическое, стандартное отклонение, стандартная ошибка, коэффициент вариации по продуктивности и устойчивости внимания, а также по показателям темпа выполнения.

Средняя арифметическая вычисляется по формуле:

где Xi — значение признака, варианта;

где x2 — сумма квадратов центральных отклонений, т. е. квадратов разностей между каждым значением и средней арифметической;

n — 1 — число степеней свободы, равное числу объектов в группе без одного.

Ошибка стандартного отклонения:

где у — стандартное отклонение;

м — средняя арифметическая.

В результате обработки полученного материала, был проведён статистический анализ, построены графики зависимости показателей концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов, от воздействующего на них фактора физической нагрузки, а также таблицы результатов дисперсионного анализа, для каждого из исследуемых показателей.

Статистическая обработка результатов исследований выполнена с использованием прикладных программ MS Excel 2007 и Statistica for Windows 6.0. Оценка достоверности различий осуществлялась на основе критерия Фишера. Влияние физической нагрузки на показатели крови оценено методом однофакторного дисперсионного [23].

источник

1. Клиническая трактовка результатов общего анализа крови (см. ход занятия, п.2-5).

2. Проведение макроскопического, микроскопического, бактериоскопического и бактериологического исследования мокроты (см. ход занятия, п.7).

3. Проведение макроскопического, физико-химического и бактериологического исследования плевральной жидкости (см. ход занятия, п.9).

4. Клиническая оценка результатов лабораторного анализа мокроты и плевральной жидкости (см. ход занятия, п.7,9).

В ходе занятия обсуждаются контрольные вопросы согласно темы занятия и отрабатываются практические навыки (п.4.).

Взятие крови для общего клинического анализа крови производят путем укола в мякоть IV пальца левой руки или мочку уха. Для укола палец обрабатывают ватным шариком, смоченным раствором антисептика, чаще всего септоцида. Укол лучше производить сбоку, где более густая капиллярная сеть, на глубину 2-3 мм в зависимости от толщины кожи. Кровь из ранки должна вытекать свободно, так как при сильном надавливании на палец возможно примешивание тканевой жидкости, приводящее к искажению результатов.

Не рекомендуется брать кровь сразу после физической и умственной нагрузки, приема медикаментов, физиотерапевтических процедур, диагностических манипуляций. Необходимо производить забор крови натощак. Повторные исследования желательно проводить в одни и те же часы, поскольку морфологический состав крови подвержен колебаниям на протяжении суток.

Для исследования гемограммы используют пробирочный метод взятия крови. Точная дозировка крови и разводящих жидкостей достигается с помощью калиброванных пипеток и дозаторов.

Общий клинический анализ крови включает определение следующих компонентов:

3) индексы красной крови (цветовой показатель и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците);

4) скорость оседания эритроцитов (СОЭ);

6) осмотическая резистентность эритроцитов и их диаметр;

7) количество ретикулоцитов;

8) количество лейкоцитов и лейкоцитарная формула;

2. Методика определения концентрации гемоглобина, количества эритроцитов и ретикулоцитов. Расчет индексов красной крови: цветовой показатель и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците. Диагностическое значение. Гематокритное число.

Предложено много методов определения концентрации гемоглобина. Важнейшие из этих методов – колориметрические. Чаще колориметрируют цветные производные гемоглобина: хлорид гематина, цианметгемоглобин, карбоксигемоглобин и др. Концентрацию гемоглобина измеряют фотоэлектроколориметрами, приборами ГФ-2 и ГФ-3, гемоглобинометрами при автоанализаторах.

Унифицированным является цианметгемоглобиновый фотометрический метод. Он основан на превращении гемоглобина в цианметгемоглобин при добавлении к крови реактива (раствора Драбкина), содержащего железосинеродистый калий и цианид калия. Концентрацию цианметгемоглобина измеряют фотометрически, а расчет количества гемоглобина производят по калибровочному графику.

Гематиновый метод Сали основан на превращении гемоглобина при добавлении к крови хлористоводородной кислоты в хлорид гематина (хлоргемин) коричневого цвета, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина. В настоящее время этот метод не имеет широкого применения.

В норме концентрации гемоглобина составляет:

Увеличение концентрации гемоглобина наблюдается у людей, живущих в условиях высокогорья, при обезвоживании у работников горячих цехов, после обильной рвоты и при диарее, при массивных ожогах, при эритремии и др.

Уменьшение концентрации гемоглобина наблюдается при анемиях, а так же при обильном употреблении жидкости, гемодилюции лекарственными инфузионными средствами и др.

Определение количества эритроцитов крови выполняется следующими методами:

Подсчет эритроцитов в счетной камере с сеткой Горяева.

Принцип метода: в строго определенном объеме каме­ры подсчитывают под микроскопом клеточные элементы, а затем производят перерасчет полученного результата на 1 мкл крови. С целью уменьшения количества клеток, подлежащих подсчету, кровь предварительно разводят в смесителях или пробирках.

смесители (меланжеры) или пробирки для разведе­ния крови;

3 % раствор хлорида натрия или жидкость Гайема для разведения эритроцитов (ртути хлорид — 0,5 г; натрия сульфат — 5,0 г; натрия хлорид — 1,0 г; вода дистиллиро­ванная — до 200 мл);

Смесители представляют собой капиллярную пипетку с резервуаром, содержащим бусинку, способствующую смешиванию крови с жидкостью для разведения. На сме­сителе нанесены метки: одна — 0,5, другая — перед входом в резервуар — 1,0, третья — у выхода из ампулы — 101. При набирании крови в пипетку до метки 0,5 она будет разве­дена в 200 раз, до 1,0 — в 100 раз.

Счетная камера представляет собой стеклянную плас­тинку с выгравированной или наклеенной сеткой Горяе­ва. Обычно на одной пластинке имеются две сетки, разде­ленные между собой глубокой канавкой, что позволяет ис­пользовать одну сетку для подсчета эритроцитов, а другую — для подсчета лейкоцитов. По краям сеток находятся воз­вышения, к ним притираются покровные стекла, которые образуют верхнюю границу камеры. Притирать покров­ные стекла нужно очень плотно до появления радужных колец (так называемых колец Ньютона), ибо только в этом случае будут соблюдены необходимые высота (1/10 мм) и объем счетной камеры. Сетка Горяева имеет 225 больших квадратов (15 х15), 25 из которых раз­делены на малые, по 16 в каждом. Каждая сторона малого квадрата равна 1/20 мм, а так как высота камеры состав­ляет 0,1 мм, то объем счетной камеры, ограниченной од­ним малым квадратом, будет равен 1/4000 мм 3 .

Ход исследования: в сухую чистую пробирку или сме­ситель отмеривают раствор хлорида натрия или жидкость Гайема. Пипеткой от гемометра Сали набирают кровь из пальца, вытирают кончик пипетки марлей или фильтро­вальной бумагой, выдувают кровь на дно пробирки с жидкостью для разведения. Подготавливают камеру Горяева. Затем концом круглой стеклянной палочки или пастеровской пипеткой наносят каплю разведенной кро­ви на среднюю пластинку камеры у края покровного стекла.

Интерпретация полученных данных. Подсчет эрит­роцитов производят спустя 1-2 мин после заполнения ка­меры (когда эритроциты осядут на дно камеры) при малом увеличении микроскопа (объектив 8х, окуляр — 10х или 15х) и при затемненном поле зрения (при опущенном кон­денсоре или прикрытой диафрагме). Считать эритроциты необходимо в 5 больших квадратах, т. е. в 80 маленьких, расположенных по диагонали. Подсчету подлежат все эритроциты, лежащие внутри малого квадрата, и те, кото­рые находятся на левой и верхней линиях. Эритроциты, расположенные на правой и нижней линиях, не считают, так как они будут учтены в следующем квадрате.

Количество эритроцитов в 1 мкл (мм 3 ) крови высчиты­вают по следующей формуле:

где X — количество форменных элементов в 1 мкл крови; А — количество форменных элементов, сосчитанных в опреде­ленном количестве малых квадратов (для эритроцитов — в 80); Б — количество сосчитанных малых квадратов (80); В — степень разведения крови (для подсчета эритроцитов -100 или 200); 4000 — величина, умножая на которую, мы получаем количество клеток в 1 мкл (1 мм 3 ), так как объ­ем 1 маленького квадрата равен 1/4000 мм.

Для перевода в систему СИ (пересчет на 1 л крови) по­лученную цифру умножают на 10 6 (или количество целых единиц умножают на 10 12 ).

Методика подсчета эритроцитов в счетной камере дос­таточно точна (ошибка может достигать 2,5 %), но весьма трудоемка. Ошибки могут быть обусловлены: образовани­ем сгустка, недостаточным количеством подсчитанных квадратов, несоблюдением условий, обеспечивающих правильную высоту счетной камеры (притирание покров­ных стекол без образования радужных колец), неравно­мерным заполнением камеры (образование пузырьков воздуха), подсчетом эритроцитов без выжидания 1-2 мин (эритроциты не успевают осесть и результат оказывается заниженным), плохо вымытыми смесителем и счетной ка­мерой, недостаточной квалификацией лаборанта, выпол­няющего исследование.

Фотометрический метод подсчета количества эритроцитов – основан на фотометрическом измерении степени погашения света определенных длин волн взвесью эритроцитов. Процент задержанного света прямо пропорционален числу эритроцитов. Для этого используют приборы типа эритрогемометров и электрофотоколориметры.

Электронно-автоматический метод. Используются приборы автоматического счета частиц крови, работающие по импульсному и сцинтиляционному принципу (счетчики «Целлоскоп» и «Культер», автоанализаторы «Техникон»).

Нормальное количество эритроцитов:

— у женщин 3.7 – 4.7 х 10 12 /л;

— у мужчин 3,9 — 5,1 х 10 12 /л.

Увеличение количества эритроцитов наблюдается:

1) при эритремии (абсолютный первичный эритроцитоз);

2) при гипоксии: обструктивная вентиляционная недостаточность, при наличии альвеолярно-капиллярного блока – фиброзирующий альвеолит и легочные васкулиты, врожденные пороки сердца с шунтом справа налево и др;

3) при гемоглобинопатиях (наследственные заболевания, характеризующиеся наличием в эритроцитах аномальных гемоглобинов);

4) при вторичных абсолютных эритроцитозах, связанных с повышенной продукцией эритропоэтинов (рак почек, гидронефроз и поликистоз почек, рак печени и др.);

5) при вторичных абсолютных эритроцитозах, связанных с избытком адренокортикостероидов или андрогенов (феохромоцитома, синдром / болезнь Иценко-Кушинга, гиперальдостеронизм);

6) при относительных эритроцитозах вследствие обезвоживания, стрессов, алкоголизма, повышенной физической нагрузки, проживания в условиях высокогорья и др.

Уменьшение количества эритроцитов характерно для анемий различного происхождения. От истинной анемии, характеризующейся абсолютным уменьшением эритроцитарной массы, нужно отличать анемию (эритроцитопению) вследствие гидремии (снижение гематокрита из-за увеличения объема плазмы).

Уменьшение количества эритроцитов (анемия, эритроцитопения) наблюдается при постгеморрагических анемиях, анемиях вследствие недостаточного кровеобразования (железодефицитная, витамин-В12- и фолиеводефицитная), анемиях в результате усиленного распада эритроцитов (гемолитические), железоперераспределительных и метапластических (при опухолевых заболеваниях крови) анемиях и др.

Расчет индексов красной крови: цветовой показатель и среднее содержание гемоглобина в одном эритроците.

Под индексами красной крови понимают среднее содержание гемоглобина в одном эритроците и цветовой показатель.

Определение среднего содержания гемоглобина в одном эритроците производят делением концентрации гемоглобина на число эритроцитов в одинаковом объеме крови. В норме 1 эритроцит содержит 33 пг гемоглобина (допустимые колебания 27-33.4 пг).

Величину 33 пг условно принимают за единицу (норма содержания гемоглобина в одном эритроците) и обозначают как цветовой показатель.

Цветовой показатель отражает насыщение эритроцита гемоглобином.

Вычисление цветового показателя (ЦП) производят по формуле:

три первые цифры числа эритроцитов (в миллионах)

две первые цифры числа эритроцитов (в миллионах)

ГЕМОГЛОБИН (в условных единицах)

две первые цифры числа эритроцитов (в миллионах)

В норме цветовой показатель равен 0,85 – 1,05.

Индексы красной крови важны для суждения о нормо-, гипер-, гипохромии эритроцитов.

Гиперхромия – увеличение среднего содержания гемоглобина в 1 эритроците, дающее цветовой показатель выше 1.05, зависит исключительно от увеличения объема эритроцитов, а не от повышенного насыщения их гемоглобином, так как нормальный эритроцит насыщен гемоглобином до предела. Гиперхромия характерна для мегалобластных анемий, обусловленных дефицитом витамина В12 и фолиевой кислоты.

Гипохромия – уменьшение среднего содержания гемоглобина в 1 эритроците, дающее ЦП ниже 0.85, может быть так же следствием уменьшения объема эритроцитов. Гипохромия служит истинным показателем или дефицита железа в организме, или железорефрактерности. Гипохромия наблюдается при хронических кровопотерях, железодефицитных и железорефрактерных анемиях, свинцовой интоксикации и др.

Нормохромия – это нормальное содержание гемоглобина в эритроците (ЦП -0,85-1,05). Нормохромные анемии развиваются при равномерном уменьшении содержания эритроцитов и количества гемоглобина и наблюдается в случаях острых кровопотерь, при гипопластической анемии, при гемолизе, сепсисе.

Гематокрит (гематокритное число) – дает представление о соотношении между объемом плазмы и объемом форменных элементов крови. Определяется с помощью следующих методов.

Метод центрифугирования в гематокритной трубке.

Электронно-автоматический метод (с помощью аппаратов «Целлоскоп» и «Культер»).

Нормальные величины гематокрита:

Гематокритное число учитывается при диагностике полицитемических и олигоцитемических состояний.

Ретикулоциты – это молодые эритроциты, содержащие базофильную субстанцию в виде сеточки, представленную агрегированными рибосомами и митохондриями. Сеточка обнаруживается при прижизненной окраске мазков крови 1% раствором бриллианткрезил синего. Подсчет производится под иммерсионным объективом по отношению к 1000 эритроцитов.

В норме содержание ретикулоцитов в периферической крови составляет 2-10º/○○ (0,2-1,2%). Ретикулоцитоз отображает степень регенераторной способности костного мозга. При гемолизе, кровопотерях эритропоэз в нормальном костном мозге активизируется, и число ретикулоцитов в нем и в периферической крови возрастает. Отсутствие роста числа ретикулоцитов в выше указанных ситуациях свидетельствуют о пониженной функции костного мозга.

Ретикулоцитоз при отсутствии анемии говорит о скрытых, но хорошо компенсированных потерях крови. Высокий ретикулоцитоз наблюдается при адекватном лечении витамин-В12-дефицитной анемии.

источник

Важным расходным материалом любого гематологического анализатора являются реагенты. Они зачастую стоят достаточно дорого и постоянно требуются для выполнения анализа. Использование различных реагентов существенно влияет на себестоимость исследования и его качество. Для каждого анализатора крови разработаны специальные реагентные системы, которые имеют общие свойства.

  1. изотонический разбавитель;
  2. лизирующий раствор;
  3. промывающий раствор (для очистки системы);
  4. очищающий раствор (для очистки и/или сервисных работ).

У разных моделей гематологических анализаторов может использоваться только часть перечисленных реагентов.

Изотонический разбавитель – это буферный раствор с фиксированным значением рН, электропроводностью и осмолярностью. Раствор называется «изотоническим», так как поддерживает требуемое осмотическое давление для обеспечения постоянства объема клеток крови. Эритроциты принимают тот объем, который продиктован осмолярностью раствора. Если осмолярность раствора будет увеличена, то эритроциты сжимаются до некоего равновесного объема за 3-5 секунд. При уменьшении осмолярности раствора, происходит увеличение объема эритроцитов. Таким образом, средний объем эритроцитов (MCV) увязывается с осмолярностью изотонического разбавителя. При использовании изотонического разбавителя, который не соответствует модели и марке гематологического анализатора, получаемые значения нельзя назвать достоверными. Происходит завышение или занижение среднего объема эритроцитов.

Использование стабилизирующих добавок в изотоническом разбавителе позволяет сохранить форменные элементы крови в первом разведении в течении цикла всего анализа анализа крови на автоматическом анализаторе. Для предотвращения образования фибриновых сгустков и агрегации тромбоцитов добавляется антикоагулянт.

Использование антибактериальных добавок в гематологических реагентах, непосредственно в изотонических разбавителях, препятствуют накоплению белковых соединений и заражению гидравлических магистралей гематологических анализаторов.

Еще один важнейший реагент для гематологических исследований — лизирующий раствор (гемолитик), сохраняет лейкоциты и вызывает лизис эритроцитов. Для точного подсчета количества лейкоцитов, которые во много раз меньше эритроцитов, необходимо чтобы гемолиз эритроцитов был полный и законченный. Поэтому лизирующий раствор, включает в себя сложную композицию ионных поверхностно-активных соединений.

В автоматических анализаторах с возможностью дифференциации лейкоцитов на 3 популяции при воздействии лизирующего раствора изменяются размеры лейкоцитов. Возможно выделить лимфоциты (которые расположены на первом пике) и гранулоциты (крайний правый пик). В средней части лейкоцитарной гистограммы, находятся моноциты, базофилы и эозинофилы. Параметры реагентной системы сильно влияют на качество дифференциации лейкоцитов

Для анализаторов, имеющих возможность дифференциации лейкоцитов на 3 популяции, оптимально работать с цельной кровью. Для таких анализаторов изотонический разбавитель содержит специальные добавки, которые модифицируют мембраны лейкоцитов, и его возможно использовать только в согласованной паре с лизирующим раствором.

Промывающие растворы косвенным образом участвуют в процессе измерения. Без качественной промывки магистралей гематологического анализатора крови невозможно добиться точных результатов. Для анализаторов, в которых применен принцип Культера, характерно наличие счетных апертур малого диаметра. Вещества в крови осаждаются на апертуре и на поверхностях гидравлической системы. Это приводит к уменьшению диаметра апертуры и ее засорении, как следствие, к ошибочным результатам. Поэтому выбор качественных промывочных растворов влияет на ресурс и стабильность работы автоматического анализатора.

Промывающие растворы бывают трех типов. Растворы для мягкой промывки – это первый тип. Используются для промывки магистралей анализатора клинического анализа крови между взятием проб. Данный тип растворов не содержит активных детергентов в больших концентрациях. Растворы на основе гипохлорита натрия – второй тип растворов. Данные растворы применяются для очистки от белковых соединений. Т.к. данные растворы очень едкие, то долгий контакт раствора с деталями анализатора неблагоприятен, пластик становится ломки, метал начинает ржаветь. Данные растворы применяются для экстренной очистки и сервисных работах. Ферментативных промывающих растворов – третий тип растворов. Данный тип растворов благодаря содержанию ферментов хорошо удаляет остатки белковых соединений на стенках системы. При этом данный тип растворов нейтрален и не разрушает анализатор даже при длительном использовании.

источник

Непосредственным объектом гематологии как науки является система крови, которая состоит из кроветворных органов (костный мозг, селезенка, лимфатические узлы) и периферической крови. Если раньше круг деятельности гематолога ограничивался изучением морфологии клеточного состава периферической крови, костного мозга и лимфатических узлов, то в настоящее время сюда входит и исследование иммунной системы организма.

Кровь представляет собой жидкость сложного состава — плазму, в которой суспензированы форменные элементы: эритроциты (Red Blood Cells, RBCs — красные кровяные клетки), лейкоциты (White Blood Cells, WBCs — белые кровяные клетки) и тромбоциты (Platelets, Pits). При коагуляции крови после отделения сгустка остается жидкость, которая называется сывороткой. В периферической крови в норме содержатся зрелые клеточные элементы. Незрелые предшественники находятся в органе кроветворения — красном костном мозге.

Из методов количественного и качественного исследования форменных элементов крови наиболее распространен общеклинический анализ крови: определение концентрации гемоглобина, цветового показателя, содержания эритроцитов, лейкоцитов, лейкоцитарной формулы, описание особенностей морфологической картины клеток крови, оценка скорости оседания эритроцитов (СОЭ). При наличии изменений данных показателей дополнительно определяют количество ретикулоцитов и тромбоцитов. Эти исследования проводят всем стационарным больным. В амбулаторных условиях нередко ограничиваются недостаточно информативным определением «тройки»: количества гемоглобина, лейкоцитов и СОЭ. Клинический анализ периферической крови является одним из важнейших лабораторных тестов и иногда дает возможность сразу определить направление диагностического поиска (например, при появлении бластов в формуле крови или наличии гиперлейкоцитоза с абсолютным лимфоцитозом, тельцами Гумпрехта). На основании клинического анализа крови трудно судить о гемопоэзе в целом. Более полное представление дает параллельное изучение костного мозга (цитологическое, цитохимическое и цитогенетическое).

При патологических состояниях гематологические изменения варьируют в зависимости от тяжести процесса, стадии заболевания и наличия осложнений, сопутствующей патологии, проводимой терапии. Необходимо учитывать, что изменения лабораторных показателей (например, количества лейкоцитов и формулы крови) наблюдаются не только при патологических состояниях, но и при проведении некоторых диагностических процедур, изменении физиологического статуса организма (смена климата, время суток, возраст, физические нагрузки, гормональный фон).

Исследование рекомендуется проводить утром натощак или через 1 ч после легкого завтрака. Исследуют, главным образом, капиллярную кровь, можно использовать венозную кровь (также взятую натощак). Не рекомендуется брать кровь после физической и умственной нагрузки, применения лекарственных препаратов, особенно при внутривенном или внутримышечном их введении, воздействия рентгеновских лучей и после физиотерапевтических процедур. В экстренных случаях этими правилами пренебрегают. Повторные исследования целесообразно производить в одни и те же часы, так как морфологический состав крови подвержен колебаниям на протяжении суток.

Все необходимые исследования, а также приготовление мазков крови следует выполнять как можно скорее. При невозможности быстрого проведения исследований образец крови, тщательно перемешанной с антикоагулянтом, помещают в холодильник при 4 °С. Перед взятием крови из контейнера или пробирки ее осторожно перемешивают неоднократным перевертыванием для исключения возможных погрешностей.

  1. 5% раствор цитрата натрия (C6H5O7Na3· 5H2O); хранится 1—2 нед, помутневший раствор к употреблению негоден;
  2. Трансформирующий раствор (ацетонциангидрин — 0,5 мг; калий железосинеродистый (красная кровяная соль, K3(Fe(CN)6) — 0,2 г; натрия гидрокарбонат (NaHCO3) — 1 г; дистиллированная вода — до 1 л;
  3. Изотонический раствор (0,9%) натрия хлорида или реактив Гайема: хлорид ртути II (HgCl2) — 0,5 г; сульфат натрия (Na2SO4) — 5 г; натрия хлорид (NaCl) — 1 г; вода дистиллированная — до 200 мл);
  4. 3—5% раствор уксусной кислоты;
  5. 14% раствор сульфата магния;
  6. 6% раствор ЭДТА;
  7. 1% раствор оксалата аммония (NH4C2O4);
  8. Спирт этиловый;
  9. 3—5% спиртовой раствор йода.
  1. копья для прокола пальца (одноразовые);
  2. пробирки;
  3. пипетки вместимостью 0,02 мл стерильные;
  4. капилляры от аппарата Панченкова стерильные;
  5. предметные стекла;
  6. шлифованные стекла.

Взятие капиллярной крови

Капиллярную кровь получают с помощью прокола: 1) мочки уха; 2) мякоти концевых фаланг пальцев рук; 3) у новорожденных и детей раннего возраста — подошвенной поверхности пятки или большого пальца ноги. Прокол должен быть глубиной около 3—4 мм. Не следует брать кровь из воспаленных или поврежденных участков. Если место предполагаемого прокола холодное или цианотичное, его предварительно согревают массированием или погружением конечности в теплую воду, иначе могут быть получены ошибочные результаты. Кожу обрабатывают 70% этиловым спиртом или специальным антисептическим раствором, дают высохнуть и затем прокалывают. Первую каплю снимают ватным тампоном, выдавливать кровь не рекомендуется. Чтобы получить достаточное количество крови, осуществляют легкий нажим с помощью стерильного тампона.

Для определения числа эритроцитов и лейкоцитов используется пробирочная (безмеланжерная) методика Н. М. Николаева (1954).

Для подсчета числа эритроцитов берут 0,02 мл крови и разводят в пробирке 4 мл 0,9% раствора натрия хлорида (разведение в 200 раз).

Для подсчета количества лейкоцитов также берут 0,02 мл крови и разводят в пробирке 0,4 мл 3-5% раствора уксусной кислоты, подкрашенного несколькими каплями раствора метиленового синего (для окраски ядер лейкоцитов). Тщательно перемешивают. Уксусная кислота гемолизирует эритроциты.

Для определения концентрации гемоглобина в сухую стерильную пипетку набирают 0,02 мл крови и разводят ее в пробирке с трансформирующим раствором (5 мл), перемешивают.

Для определения СОЭ в капилляр от аппарата Панченкова, промытый 5% раствором цитрата натрия, набирают кровь до метки (100 делений) и тщательно выдувают ее в пробирку с подготовленным 5% раствором цитрата натрия (соотношение крови и реактива 4:1), пробирку встряхивают. Время взятия крови записывают.

Для подсчета количества ретикулоцитов можно проводить окраску препарата непосредственно на стекле или в пробирке. Используют унифицированную методику подсчета количества ретикулоцитов. На подготовленное предметное стекло с одним из красителей (бриллиантовый крезиловый синий, азур I или II) наносят каплю крови, готовят тонкий мазок. Для окраски в пробирке в рабочий раствор бриллиантового крезилового синего (5 капель) добавляют 0,04 мл крови, тщательно, но осторожно перемешивают и через 30 мин готовят тонкие мазки.

Количество тромбоцитов на 1000 эритроцитов можно определять унифицированной методикой Фонио в окрашенных мазках крови. Капилляром Панченкова берут реактив (14% раствор сульфата магния или 6% раствор ЭДТА) до метки «75» и смешивают с кровью, взятой тем же капилляром, до метки «0». Перемешивают, готовят мазки. Фиксируют и окрашивают по Романовскому–Гимзе. Существует также унифицированная методика подсчета тромбоцитов в счетной камере. К 4 мл 1 % раствора оксалата аммония добавляют 0,02 мл крови, перемешивают, оставляют на 25—30 мин для гемолиза эритроцитов.

Для исследования лейкоцитарной формулы, морфологии эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов готовят препараты. Наносят каплю крови на сухое обезжиренное предметное стекло и быстро готовят тонкие мазки с помощью шлифованного стекла.

В настоящее время в связи с появлением гематологических автоматических анализаторов стали шире использовать для общего клинического анализа венозную кровь, которую берут либо в специальные пластиковые пробирки одноразового пользования с порошком ЭДТА, либо в стеклянные пробирки с другим антикоагулянтом. Сразу после взятия крови пробирку закрывают пробкой и несколько раз тщательно перемешивают кровь, не взбалтывая, что позволяет избежать образования сгустков, наличие которых искажает результаты.

Взятие венозной крови

Пациенту объясняют характер предстоящей процедуры. Осматривают его вены, при необходимости используя жгут. Берут шприц емкостью, соответствующей количеству крови, необходимому для анализа. Игла должна быть меньше 22 размера, от 2,5 до 4 см длиной. На плечо накладывают «венозный» жгут. Вместо жгута можно использовать манжету сфигмоманометра под давлением, средним между систолическим и диастолическим у данного пациента. Пациента просят сжать и разжать несколько раз кулак. Тщательно обрабатывают кожу в месте предполагаемого забора (обычно локтевая вена на внутренней поверхности локтевого сгиба) 70 % этиловым спиртом или другим антисептическим раствором и пунктируют вену. Иногда в сосуд сразу попасть не удается, в таком случае прокалывается кожа вблизи вены, а затем пунктируется вена. В тот момент, когда игла попадает в вену, кровь поступает в шприц. Если кровь не получена, иглу подтягивают на себя, и кровь обычно начинает течь в шприц. Жгут ослабляют и просят пациента разжать кулак. После процедуры, легко нажимая кусочком стерильной ваты, вытирают место укола. Прежде чем отпустить пациента, убеждаются, что кровотечение прекратилось. У грудных детей кровь может быть получена из бедренной или наружной яремной вены. Кровь из шприца аккуратно сливают в пробирку или специальный контейнер, предварительно сняв иглу.

В последнее время для забора как венозной, так и капиллярной крови широко используются одноразовые системы, поставляемые на рынок различными фирмами. В частности на российском рынке представлены системы взятия венозной крови Vacuette производства компании Greiner Bioone (Австрия). Всем хорошо известны современные требования к забору крови из вены. Выполняя эти требования, часто приходится сталкиваться с целым рядом сложностей: это и тромбирование крови в игле, и гемолиз, вызванный двукратным прохождением крови через иглу. При необходимости заполнить кровью несколько пробирок увеличивается длительность забора крови. Если планируется определение факторов свертывания, очень важно точно соблюдать соотношение кровь—антикоагулянт, что не всегда удается. Различные неприятности случаются также и при доставке пробирок с кровью в лабораторию: часто приходится сталкиваться с тем, что пробирка разбилась, кровь разлилась или часть крови впиталась в ватный тампон, которым закрыта пробирка. Кроме того, несмотря на то, что персонал работает в перчатках, кровь пациента может попасть на руки.

Эти и многие другие проблемы легко решаются при использовании вакуумных систем для взятия крови Vacuette. Система обеспечивает полную безопасность медицинского персонала при работе в момент взятия крови, так как полностью исключается контакт крови пациента с окружающей средой. Процедура взятия крови занимает всего 30 секунд и безболезненна для пациента. Система обеспечивает максимально точное соблюдение правил преаналитического этапа лабораторных исследований, существенно сокращая вероятность ошибочного результата. Разнообразие компонентов системы позволяет удобно и безопасно взять кровь для любых видов лабораторного анализа. Vacuette® — полностью «закрытая» вакуумная система для взятия крови из вены).

Система Vacuette® аналогична обычному шприцу, но вместо поршня используется перепад давлений, возникающий благодаря тому, что в пробирке создан вакуум. Система максимально удобна в обращении и обеспечивает полную защиту медицинского персонала от возможного заражения.

Кровь, взятая для получения сыворотки или плазмы, центрифугируется непосредственно в пробирке. Возможно также использование пробирок с гелем, который после центрифугирования отделяет сыворотку (плазму) от сгустка, полностью препятствуя обратному смешению.

Осложнения при взятии крови

Ранние осложнения: гематома и коллапс (обморок).

Избежать гематомы можно созданием в месте прокола адекватного давления, наложив тугую повязку.

В случае обморока пациента необходимо уложить на кушетку, дать понюхать раствор нашатырного спирта и вызвать врача.

Поздние локальные осложнения: тромбоз вены, иногда может развиться тромбофлебит.

Поздние общие осложнения: заражение вирусами гепатитов В и С, ВИЧ через инфицированную иглу или шприц.

Профилактика осложнений:

  • если кровотечение из места прокола трудно остановить, этому участку тела придают возвышенное положение и накладывают давящую повязку. Пациента наблюдают до тех пор, пока кровотечение не прекратится;
  • кровь для любых лабораторных исследований не рекомендуется брать из той конечности, в которую переливают кровь;
  • у больных лейкозами, агранулоцитозом и пациентов с пониженной сопротивляемостью организма (иммунодефициты) прокол пальца или мочки уха может вызвать инфекцию скорее, чем венепункция. Если для исследования все же требуется капиллярная кровь, кожу необходимо особенно тщательно обрабатывать дезинфицирующим агентом. Этиловый спирт не является средством выбора, лучше использовать специальные антисептические растворы.

источник



Источник: domofoniya.com


Добавить комментарий