Ручной метод анализа крови

Ручной метод анализа крови

2.1. Техника забора крови и подготовки
образца крови для исследования

Шаг А. Подготовка растворов, пробирок и другого инструментария (табл. 1).

Таблица 1. Необходимые подготовительные процедуры при проведении общего анализа крови

Определяемый показатель Посуда Раствор, его объем и состав
СОЭ Химическая пробирка и капилляр Панченкова 5 %-ный раствор C6H5O7Na3∙5H2O набрать в капилляр Панченкова до метки 0,75 и затем выдуть в химическую пробирку
Гемоглобин Химическая пробирка 4 мл трансформирующего раствора (ацетоциангидрин – 0,5 мг, калий железосинеродистый – 0,2 г, натрия гидрокарбонат – 1 г, дистиллированная вода – до 1 л)
Количество эритроцитов Химическая пробирка 4 мл изотонического раствора хлорида натрия
Количество лейкоцитов Химическая пробирка 0,4 мл 3–5 %-ной уксусной кислоты (уксусная кислота разрушает эритроциты, визуализируя тем самым лейкоциты)
Количество тромбоцитов Химическая пробирка 4 мл 1 %-ного раствора оксалата аммония (раствор разрушает эритроциты, визуализируя тромбоциты)

Забор крови из мякоти пальца (капиллярная кровь).

Тщательно протирают кожу мякоти пальца ватным шариком, смоченным спиртом, делают укол стерильным копьем до упора. Первую выступившую каплю крови вытирают сухим ватным шариком; из следующих капель, выступающих из мест укола при легком надавливании, быстро набирают необходимое количество крови: для СОЭ, для определения гемоглобина, для определения числа эритроцитов, для определения числа лейкоцитов, для исследования лейкоцитарной формулы, для определения тромбоцитов.

Забор крови из вены (венозная кровь).

Накладывают жгут на 8–10 см выше локтевого сгиба. Обрабатывают кожу локтевого сгиба над обнаруженной по характерному вздутию вены шариком, смоченным спиртом или другим антисептиком. В вену вводят иглу с подсоединенным шприцем и набирают необходимое для анализа количество крови. Кровь осторожно (не вспенивая, так как при этом происходит разрушение эритроцитов и других клеток крови) выпускают в пробирку с порошком ЭДТА или другим антикоагулянтом. Пробирку закрывают пробкой и тщательно перемешивают кровь для распределения антикоагулянта, опрокидывая пробирку сначала пробкой вниз, затем пробкой вверх. В настоящее время используются специальные системы для забора крови и ее одновременного помещения в одноразовую пластиковую пробирку с антикоагулянтом. Предпочтение исследования венозной крови связано с возможностью одновременного получения объема крови, необходимого для разных анализов.

Шаг В. Внесение крови в подготовленную лабораторную посуду

Кровь вносят в подготовленную посуду специальным капилляром объемом 20 мкл согласно приведенным в табл. 2 разведениям в указанном выше порядке. Набирают ее капилляром до метки 0,02 из мест укола в мякоти пальца или пробирки с венозной кровью, кончик капилляра промокают фильтровальной бумагой, выдувают кровь в соответствующую пробирку и промывают капилляр (путем заполнения капилляра и выдувания раствора) в реактиве той же пробирки для максимально полного внесения образца крови.

Таблица 2. Объемы крови для определения показателей общего анализа крови

Определяемый показатель Объем диагностического раствора Объем крови
СОЭ 1/4 часть капилляра Панченкова (до отметки 0,75), раствор вносится в химическую пробирку Полный капилляр Панченкова до отметки 0, кровь вносится в химическую пробирку с раствором цитрата калия (соотношение кровь : цитрат = 4 : 1)
Гемоглобин 4 мл 0,02 мл
Количество эритроцитов 4 мл 0,02 мл (разведение 1 : 200)
Количество лейкоцитов 0,4 мл 0,02 мл (разведение 1 : 20)
Количество тромбоцитов 4 мл 0,02 мл (разведение 1 : 200)

Затем для последующего определения лейкоцитарной формулы каплю крови наносят на край обезжиренного предметного стекла и быстро готовят тонкий мазок с помощью шлифованного стекла, краем которого быстрым движением продвигают каплю крови по предметному стеклу.

Таким образом, после выполнения шага В для исследования образца крови имеются 4 пробирки со смесью крови и соответствующего реактива и приготовленный тонкий мазок крови на предметном стекле, необходимые для дальнейших диагностических процедур с использованием специального оборудования (табл. 3).

Таблица 3. Оборудование и методы определения основных показателей общего анализа крови

Определяемый показатель Необходимое оборудование Метод
СОЭ Аппарат Панченкова (штатив и капилляры – 1 на каждый образец крови) Седиментационный с последующим визуальным учетом
Гемоглобин Фотоэлектроколориметр Биохимический с ФЭК-учетом результатов
Количество эритроцитов Камера Горяева, световой микроскоп Микроскопический
Количество лейкоцитов Камера Горяева, световой микроскоп Микроскопический
Количество тромбоцитов Камера горяева, световой микроскоп Микроскопический

2.2. Техника определения показателей
общего анализа крови

источник

Вряд ли найдется кто-то, кто еще ни разу не сдавал кровь из пальца на анализы. Общий анализ крови берут практически при любом заболевании. Так в чем же его диагностическая ценность и какие диагнозы он может подсказать? Разбираем по-порядку.

Основные показатели, на которые врач обращает внимание при расшифровке общего анализа крови — это гемоглобин и эритроциты, СОЭ, лейкоциты и лейкоцитарная формула. Остальные скорее являются вспомогательными.

Чаще всего общий анализ крови назначают, чтобы понять, есть ли в организме воспаление и признаки инфекции, и если да, то какого происхождения — вирусного, бактериального или другого.

Также общий анализ крови может помочь установить анемию — малокровие. И если в крови есть ее признаки — назначают дополнительные анализы, чтобы установить причины.

Еще общий анализ крови назначают, если есть подозрение на онкологический процесс, когда есть ряд настораживающих симптомов и нужны зацепки. В этом случае кровь может косвенно подсказать, в каком направлении двигаться дальше.

Другие показания обычно еще реже.

Сейчас на бланках с результатом анализов в основном используют англ. аббревиатуры. Давайте пройдемся по основным показателям и разберем, что они значат.

Это более детальная информация о тех самых WBC из предыдущего блока.

Лейкоциты в крови очень разные. Все они в целом отвечают за иммунитет, но каждый отдельный вид за разные направления в иммунной системе: за борьбу с бактериями, вирусами, паразитами, неспецифическими чужеродными частицами. Поэтому врач всегда смотрит сначала на общий показатель лейкоцитов из перечня выше, а затем на лейкоцитарную формулу, чтобы понять, а какое звено иммунитета нарушено.

Обратите внимание, что эти показатели обычно идут в двух измерениях: абсолютных (абс.) и относительных (%).

Абсолютные показывают, сколько штук клеток попало в поле зрение, а относительные — сколько эти клетки составляют от общего числа лейкоцитов. Это может оказаться важной деталью — например, в абсолютных цифрах лимфоциты вроде как в приделах нормы, но на фоне общего снижения всех лейкоцитов — их относительное количество сильно выше нормы. Итак, лейкоцитарная формула.

А теперь пройдемся по каждому из этих показателей и разберем, что они значат.

Гемоглобин — это белок, который переносит по организму кислород и доставляет его в нужные ткани. Если его не хватает — клетки начинают голодать и развивается целая цепочка симптомов: слабость, утомляемость, головокружение, выпадение волос и ломкость ногтей, заеды в уголках губ и другие. Это симптомы анемии.

В молекулу гемоглобина входит железо, а еще в его формировании большую роль играют витамин В12 и фолиевая кислота. Если их не хватает — в организме нарушается синтез гемоглобина и развивается анемия.

Есть еще наследственные формы анемии, но они случаются гораздо реже и заслуживают отдельного разбора.

В норме гемоглобин составляет 120−160 г/л для женщин и 130-170 г/л для мужчин. Нужно понимать, что в каждом конкретном случае нормы зависят от лаборатирии. Поэтому смотреть нужно на референсные значения той лаборатории, в которой вы сдавали анализ.

Повышенные цифры гемоглобина чаще всего случаются из-за сгущения крови, если человек излишне потеет во время жары, или принимает мочегонные. Еще повышенным гемоглобин может быть у скалолазов и людей, которые часто бывают в горах — это компенсаторная реакция на недостаток кислорода. Еще гемоглобин может повышаться из-за заболеваний дыхательной системы — когда легкие плохо работают и организму все время не хватает кислорода. В каждом конкретном случае нужно разбираться отдельно.

Снижение гемоглобина — признак анемии. Следующим шагом нужно разбираться какой.

Эритроциты — это красные клетки крови, которые транспортируют гемоглобин и отвечают за обменные процессы тканей и органов. Именно гемоглобин, а точнее — его железо, красит эти клетки в красный.

Нормы для мужчин — 4,2-5,6*10*9/литр. Для женщин — 4-5*10*9/литр. Которые опять-таки зависят от лаборатории.

Повышаться эритроциты могут из-за потери жидкости с потом, рвотой, поносом, когда сгущается кровь. Еще есть заболевание под названием эритремия — редкое заболевание костного мозга, когда вырабатывается слишком много эритроцитов.

Снижении показателей обычно является признаком анемии, чаще железодефицитной, реже — другой.

Норма — 80-95 для мужчин и 80-100 для женщин.

Объем эритроцитов уменьшается при железодефицитной анемии. А повышается — при В12 дефицитной, при гепатитах, снижении функции щитовидной железы.

Повышается этот показатель редко, а вот снижение — признак анемии или снижения функции щитовидной железы.

Повышение значений почти всегда свидетельствует об аппаратной ошибке, а снижение – о железодефицитной анемии.

Это процентное соотношение форменных элементов крови к ее общему объему. Показатель помогает врачу дифференцировать, с чем связана анемия: потерей эритроцитов, что говорит о заболевании, или с избыточным разжижением крови.

Это элементы крови, ответственные за формирование тромботического сгустка при кровотечениях. Превышение нормальных значений может свидетельствовать о физическом перенапряжении, анемии, воспалительных процессах, а может говорить о более серьезных проблемах в организме, среди которых онкологические заболевания и болезни крови.

Снижение уровня тромбоцитов в последние годы часто свидетельствует о постоянном приеме антиагрегантов (например, ацетилсалициловой кислоты) с целью профилактики инфаркта миокарда и ишемического инсульта головного мозга.

А значительное их снижение может быть признаком гематологических заболеваний крови, вплоть до лейкозов. У молодых людей — признаками тромбоцитопенической пурпуры и других заболеваний крови. Так же может появляться на фоне приема противоопухолевых и цитостатических препаратов, гипофункции щитовидной железы.

Это основные защитники нашего организма, представители клеточного звена иммунитета. Повышение общего количества лейкоцитов чаще всего свидетельствует о наличии воспалительного процесса, преимущественно бактериальной природы. Также может оказаться признаком так называемого физиологического лейкоцитоза (под воздействием боли, холода, физической нагрузки, стресса, во время менструации, загара).

Нормы у мужчин и женщин обычно колеблются от 4,5 до 11,0*10*9/литр.

Снижение лейкоцитов – признак подавления иммунитета. Причиной чаще всего являются перенесенные вирусные инфекции, прием некоторых лекарств (в том числе нестероидных противовоспалительных и сульфаниламидов), похудение. Гораздо реже — иммунодефициты и лейкозы.

Самый большой пул лейкоцитов, составляющий от 50 до 75% всей лейкоцитарной популяции. Это основное звено клеточного иммунитета. Сами нейтрофилы делятся на палочкоядерные (юные формы) и сегментоядерные (зрелые). Повышение уровня нейтрофилов за счёт юных форм называют сдвигом лейкоцитарной формулы влево и характерно для острой бактериальной инфекции. Снижение — может быть признаком вирусной инфекции, а значительное снижение — признаком заболеваний крови.

Второй после нейтрофилов пул лейкоцитов. Принято считать, что во время острой бактериальной инфекции число лимфоцитов снижается, а при вирусной инфекции и после неё – повышается.

Значительное снижение лимфоцитов может наблюдаться при ВИЧ-инфекции, при лейкозах, иммунодефицитах. Но это случается крайне редко и как правило сопровождается выраженными симптомами.

Редкие представители лейкоцитов. Повышение их количества встречается при аллергических реакциях, в том числе лекарственной аллергии, также является характерным признаком глистной инвазии.

Самая малочисленная популяция лейкоцитов. Их повышение может говорить об аллергии, паразитарном заболевании, хронических инфекциях, воспалительных и онкологических заболеваниях. Иногда временное повышение базофилов не удается объяснить.

Самые крупные представители лейкоцитов. Это макрофаги, пожирающие бактерии. Повышение значений чаще всего говорит о наличии инфекции — бактериальной, вирусной, грибковой, протозойной. А также о периоде восстановления после них и о специфических инфекциях — сифилисе, туберкулезе. Кроме того может быть признаком системных заболеваниях — ревматоидный артрит и другие.

Если набрать кровь в пробирку и оставить на какое-то время — клетки крови начнут падать в осадок. Если через час взять линейку и замерить, сколько миллиметров эритроцитов выпало в осадок — получим скорость оседания эритроцитов.

В норме она составляет от 0 до 15 мм в час у мужчин, и от 0 до 20 мм у женщин.

Может повышаться, если эритроциты чем-то отягощены — например белками, которые активно участвуют в иммунном ответе: в случае воспаления, аллергической реакции, аутоимунных заболеваний — ревматоидный артрит, системная красная волчанка и другие. Может повышаться при онкологических заболеваниях. Бывает и физиологическое повышение, объясняемое беременностью, менструацией или пожилым возрастом.

В любом случае — высокий СОЭ всегда требует дополнительного обследования. Хоть и является неспецифическим показателем и может одновременно говорить о многом, но мало о чем конкретно.

В любом случае по общему анализу крови практически невозможно поставить точный диагноз, поэтому этот анализ является лишь первым шагом в диагностике и некоторым маячком, чтобы понимать, куда идти дальше. Не пытайтесь найти в своем анализе признаки рака или ВИЧ — скорее всего их там нет. Но если вы заметили любые изменения в анализе крови — не откладывайте визит к врачу. Он оценит ваши симптомы, соберет анамнез и расскажет, что делать с этим анализом дальше.

Мы заметили, что в комментариях очень много вопросов по расшифровке анализов, на которые мы не успеваем отвечать. Кроме того, чтобы дать хорошие рекомендации — важно задать уточняющие вопросы, чтобы узнать ваши симптомы. У нас в сервисе очень хорошие терапевты, которые могут помочь с расшифровкой анализов и ответить на любые ваши вопросы. Для консультации переходите по ссылке.

источник

От каждого животного целесообразно готовить 2—3 образца разведенной крови. В пробирку вносят 0,4 мл 3 или 5 %-ного раствора уксусной кислоты, подкрашенного метиленовым синим (жидкость Тюрка). Капиллярной пипеткой набирают 0,02 мл крови, конец пипетки тщательно протирают вначале увлажненной, а затем сухой ватой или марлей. Переносят кровь в пробирку, осторожно выдувая. Пипетку ополаскивают жидкостью Тюрка. Кровь в пробирке тщательно перемешивают, закрывают и оставляют стоять на 4 мин, периодически перемешивая содержимое.
Счетную камеру предварительно тщательно обезжиривают спиртом, промывают дистиллированной водой и высушивают под феном, протирают мягкой фланелью. Чистое сухое покровное стекло притирают к камере так, чтобы появились радужные кольца. Кровь в пробирке снова перемешивают стеклянной палочкой, берут каплю крови и наносят к краю покровного стекла камеры. Подсчитывают лейкоциты через 1 мин после заполнения камеры, когда осядут клетки крови, пользуясь малым увеличением микроскопа (объектив х8, окуляр х Ю) при затемненном поле, для чего опускают конденсор или суживают диафрагму.
Подсчитывают лейкоциты в 100 больших (1600 малых) квадратах.
Расчет. Подсчитанное в 100 больших квадратах число клеток умножают на 50 (разведение крови 1 : 20), получают окончательный результат в тысячах в 1 мкл. Для подсчета клеток в 1 л количество лейкоцитов в 1 мкл умножают на 1000 (10 /л).
При подсчете лейкоцитов в камере соблюдают все те же правила, которые изложены в методике подсчета эритроцитов. Ошибка при подсчете составляет в среднем +7 %.
Наиболее вероятные источники ошибок — травмирование тканей ушной раковины при выжимании, выдавливании крови; неравномерное перемешивание крови; не очень чистый микрокапилляр и др. Каждый лабораторный работник должен выявить собственную ошибку путем многократных анализов одной и той же пробы, включая взятие крови.
Клиническое значение определения в крови эритроцитов и лейкоцитов. Родоначальной клеткой для всех форменных элементов крови является стволовая клетка, которая дает начало общей клетке — предшественника миелопоэза и общей клетке — предшественника лимфопоэза. Из клетки — предшественника миелопоэза в миелоидной системе (костный мозг), проходя определенные стадии дифференцировки, образуются эритроциты, тромбоциты, моноциты и зернистые лейкоциты. Из клетки — предшественника лимфопоэза в лимфоидной системе образуются лимфоциты: Т-лимфоциты — клетки, обеспечивающие реакции клеточного иммунитета и В-лимфоциты — клетки, обеспечивающие реакции гуморального иммунитета.
Кровь здоровых животных содержит зрелые клетки: эритроциты, тромбоциты, лейкоциты (базофилы, эозинофилы, палочкоядерные и сегментоядерные нейтрофилы, лимфоциты, моноциты) и тучные клетки (цвет. рис. I—VII). Появление незрелых промежуточных клеток миелопоэза (ретикулоцитов, нормоцитов, эритро- бластов, миелобластов, миелоцитов и др.) и лимфопоэза (плазмо- бластов, пролимфоцитов, лимфобластов и др.) свидетельствует о развитии патологии кроветворения.
Эритроциты — мелкие клетки крови, содержащие гемоглобин, благодаря чему способны переносить кислород от легких к тканям и углекислый газ от тканей к легким. Зрелые эритроциты млекопитающих — безъядерные клетки, имеют форму двояковогнутого диска. Эритроциты птиц и низших позвоночных — ядерные клетки элипсовидной формы.
В нефиксированном (нативном) препарате эритроциты выглядят как желтоватые округлые образования. В фиксированных и окрашенных мазках крови они обнаруживаются как круглые клетки розового или серовато-розового цвета с просветлением в центре.
Тромбоциты — кровяные пластинки. Это мелкие, безъядерные клетки крови диаметром 5 мкм в количестве от 200 до 900 тыс/мкл, участвуют в свертывании крови. В окрашенных мазках крови они выглядят как мелкие круглые или овальные образования. При снижении их числа наблюдается кровоточивость, развивается гемофилия.
Лейкоциты — разнообразные по морфологическим признакам и функциям клетки сосудистой системы крови. Они выполняют функции защиты организма путем фагоцитарной активности и участия в формировании гуморального иммунитета, в восстановительном процессе при тканевом повреждении. Лейкоциты, в цитоплазме которых содержится специфическая зернистость, называются зернистыми, или гранулоцитами. К ним относятся нейтрофилы (палочкоядерные, сегментоядерные и юные), эозинофилы и базофилы. Незернистые лейкоциты (агранулоциты) характеризу

ются отсутствием специфической зернистости в цитоплазме и несегментированными ядрами. В группе агранулоцитов выделяют два вида — лимфоциты и моноциты.
Содержание эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов у взрослых животных в норме приведено в таблице 4.
4. Содержание эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов у животных

Вид животного Эритроциты, млн/мкл (1012/л) Лейкоциты, тыс/мкл (109/л) Тромбоциты тыс/мкл (109/
Крупный рогатый скот 5,0-7,5 4,5-12,0 260-700
Лошадь 6,0-9,0 7,0-12,0 200-500
Овца 7,0-12,0 6,0-14,0 270-500
Свинья 6,0-7,5 8,0-16,0 180-300
Коза 12,0-17,0 6,0-12,0 300-900
Буйвол 5,2-8,7 5,5-12,1 220-380
Верблюд 10,6-16,6 11,5-20,5 200-400
Северный олень 9,0-14,0 6,0-10,0 200-500
Осел 5,0-7,0 7,0-9,0 200-500
Мул 5,1-6,8 7,0-8,0 200-400
Собака 5,2-7,4 6,0-12,0 250-550
Кошка 6,6-9,4 10,5-15,0 100-500
Птица (курица, утка, гусь) 2,5-4,5 20,0-40,0
Морская свинка 4,6-6,7 7,8-15,5
Норка 8,1-9,3 4,3-7,1
Лисица 8,3-10,3 4,2-7,0
Песец 7,6-9,0 4,7-6,9
Кролик 5,0-7,5 6,5-9,5

Уменьшение количества эритроцитов — эритроцитопения (олиго- цитемия) встречается при длительном недокорме животных, пост- геморрагической, гемолитической, железодефицитной, гипоплас- тической анемиях, В12 (фолиево)-дефицитной анемии, лейкозах, злокачественных новообразованиях. Олигоцитемия развивается при инфекционной анемии лошадей, гематурии крупного рогатого скота, пироплазмозе, нутталиозе, трипанозомозе, многих острых и хронических инфекционных и инвазионных болезнях, гепатите и гепатозе, хроническом нефрите.
Увеличение количества эритроцитов (полицитемия, эритроци- тоз) встречается при сильной диарее вследствие сгущения крови, при обильном потоотделении, непроходимости тонкого кишечника, сильной мышечной нагрузке.
Нахождение животных на высоте 1400—2000 м и выше над уровнем моря сопровождается повышением содержания эритроцитов в крови.
Увеличение количества лейкоцитов (лейкоцитоз) бывает патологическое и физиологическое. Патологический лейкоцитоз отмечается при гнойно-воспалительных процессах, сопровождающих пневмонию, бронхопневмонию, плеврит, перикардит, ретикулопе- ритонит, перитонит, абсцессы печени, эндометрит и многие другие болезни. Выраженный лейкоцитоз наблюдается при ряде инфекционных болезней, хирургической инфекции, лейкозах, лимфогранулематозе. Лейкоцитоз возникает при отравлениях мышьяком, ртутью, укусах ядовитых насекомых, змей. Увеличение количества лейкоцитов может быть в результате введения больших доз камфоры, калия йодида, белковых препаратов, вакцин, сывороток.
Физиологический умеренный лейкоцитоз бывает при беременности, после физических нагрузок, приема богатой белком пищи (у плотоядных), стрессах.
Уменьшение количества лейкоцитов (лейкоцитопения, лейкопения) может быть результатом угнетения кроветворных органов, истощения их, пониженной реактивности организма; лейкопению отмечают при вирусных болезнях, циррозе печени, поражении селезенки, действии ионизирующей радиации, ряда химических веществ и лекарственных препаратов. Смена лейкоцитоза лейкопенией при воспалительных и гнойно-септических заболеваниях служит показателем понижения резистентности организма, угнетения кроветворения, ухудшения состояния больного животного.
Течение заболеваний, для которых характерна лейкоцитопения, наблюдается у ослабленных, истощенных животных. Лейкоцитопения может быть следствием длительного введения в организм больших доз сульфаниламидов, амидопирина, левомицетина, синтомицина, препаратов ртути, мышьяка, висмута. Она отмечается при алейкемической форме лейкоза, отравлениях ДЦТ и некоторыми другими ядами.
Дифференциальный подсчет лейкоцитов (лейкотрамма). Проводят визуальную микроскопическую оценку сухих фиксированных окрашенных мазков крови с дифференцированным подсчетом лейкоцитов и описанием морфологии эритроцитов.
Лейкограмма выражается как процентное соотношение между отдельными видами лейкоцитов крови.
Морфологическое исследование мазков крови включает следующие этапы: подготовку стекол, приготовление, фиксацию, микроскопическую и морфологическую оценку мазков.
Подготовка пре дметных стекол. Предметные стекла должны быть чистыми, обезжиренными и сухими. Бывшие в употреблении или новые стекла замачивают в эмалированной посуде в стиральном порошке. Старый мазок удаляют ватным тампоном и стекла кипятят в том же растворе 10—15 мин, затем их промывают в проточной воде, насухо протирают и помещают на 30—60 мин в смесь Никифорова (этиловый спирт 9б°%-ный и диэтиловый эфир в соотношении 1:1), после чего протирают насухо чистой тканью и помещают на хранение в посуду с крышкой.
Примечания. 1. Длительное кипячение (более 10 мин) предметных стекол и кипячение их в алюминиевой посуде приводит к помутнению стекол. 2. Полноту отмывки от щелочных средств проверяют качественной реакцией с 0,1%-ным спиртовым раствором фенолфталеина, путем нанесения 2—3 капель на чистое стекло. Появление розового окрашивания свидетельствует о плохой промывке стекол.
Приготовление мазков. Мазки крови готовят на предварительно подготовленных обезжиренных предметных стеклах. Берут за ребра (а не за поверхность) предметное стекло и, отступая 1,5—2 см от узкого конца, наносят на него небольшую каплю крови. Шлифовальным стеклом, которое несколько уже, чем предметное, на которое нанесена капля крови, размазывают последнюю. Для этого шлифовальное стекло узким краем ставят под углом 45° слева от капли, слегка подвигают его вправо, чтобы провести с ней соприкосновение, выжидают, пока капля расплывется по всему ребру, и легким быстрым движением ведут стекло справа налево, пока капля будет исчерпана.
При медленном размазывании ухудшается равномерность распределения форменных элементов в мазке. При нажимании стеклом на стекло многие клетки повреждаются. Если угол между стеклами меньше 45°, то большее количество клеток скапливается в конце мазка. Величина капли должна быть соразмерна тому, чтобы весь мазок помещался на стекле, не доходя 1—1,5 см до его конца. Мазок должен иметь желтоватый цвет. Густо-розоватые и красноватые мазки не пригодны для счета, так как лейкоциты в них деформированы, а эритроциты лежат один на другом. Если была взята слишком большая капля, то после того как она распределилась по ребру шлифованного стекла, последнее приподнимают, переносят на несколько миллиметров влево, вновь ставят на предметное стекло и отсюда начинают делать мазок. Мазок тотчас сушат на воздухе. На сухом мазке по его середине иглой пишут номер или кличку животного, при необходимости и дату взятия крови.
Фиксация мазков. Фиксирующая жидкость вызывает коагуляцию белка и прикрепляет клетку к стеклу. Фиксация придает форменным элементам крови стойкость по отношению к содержащейся в краске воде и препятствует деформации эритроцитов и лейкоцитов.
Реактивы: метиловый спирт (х. ч.) или эозин метиленовый синий по Май-Грюнвальду (раствор), или этиловый спирт 96%-ный.
Оборудование: штатив для сушки мазков; пинцет; широкогорлая банка с притертой пробкой или крышкой.
Ход определения. Высохшие на воздухе мазки опускают в широкогорлую банку с крышкой, выдерживают в фиксаторе 5—10 мин, затем извлекают пинцетом и высушивают на воздухе. В этиловом спирте мазки выдерживают не менее 35 мин.
Для фиксации и последующей обработки необходимо отбирать правильно приготовленные тонкие мазки (мазок должен быть желтого цвета, отступать от края широких сторон предметного стекла на 1—3 мм и заканчиваться «метелочкой», не доходя 1,5—2 см до левого узкого края).
Окраска мазков. Оборудование: контейнеры для окраски мазков с кюветами или «рельсы» стеклянные с эмалированными лотками; пинцет; цилиндры или стаканы градуированные; палочки стеклянные; стаканчики химические; бутылки с притертыми пробками.
В строго нейтральной среде структурные элементы клеток крови в азур-эозиновой смеси окрашиваются в различные цвета: щелочные компоненты клетки (цитоплазма) — эозином в розово-красный цвет; кислые (РНК в ядрышках и цитоплазме, ДНК в ядре) — основными красителями в голубовато-синие цвета. Для приготовления красителей и смывания их с мазков используют воду нейтральной реакции. Вода кислой реакции ослабляет действие щелочного элемента красителя (азура II), вследствие чего лейкоциты плохо окрашиваются. Мазки имеют красный цвет за счет красной окраски эритроцитов и ядер лейкоцитов. Вода щелочной реакции ослабляет действие кислого компонента красителя (эозина), поэтому эритроциты окрашиваются в серовато-синий цвет, а ядра лейкоцитов — в очень темные цвета. Для подщелачивания и доведения реакции воды до нейтральной к ней по каплям прибавляют 1%-ный раствор натрия двууглекислого. Щелочную воду нейтрализуют 1%-ным раствором уксусной кислоты. Можно брать дистиллированную и водопроводную воду в различных сочетаниях.
Реакцию воды можно определить с помощью рН-метра или гематоксилина. При использовании гематоксилина к 10 мл дистиллированной воды прибавляют 2—3 капли свежеприготовленного спиртового раствора гематоксилина. Вода нейтральной реакции окрашивается в бледно-фиолетовый цвет не ранее чем через 1 мин и не позднее чем через 5 мин. Если вода окрасилась раньше чем через 1 мин, значит, она щелочная, а если позднее чем через 5 мин, — кислая.
Окраска по Нохту. Реактивы:

  1. основные растворы красителей — азур II, 1 г/л (1,0 г азура II растворяют в 1000 мл дистиллированной воды) и эозин калия,
  1. г/л (1,0 г эозина калия растворяют в 1000 мл дистиллированной воды). Растворы готовы к употреблению через 14 дней со дня приготовления, хранят их в посуде темного стекла с притертой пробкой при комнатной температуре;
  1. фосфатный буфер или смесь Вейзе (pH 7,4—7,5): калия фосфат однозамещенный безводный (КН2Р04) 0,49 г, натрия фосфат двузамещенный (ЫагНРС^ х 2НгО) 1,14 г или безводный (№2НР04) 0,909 г, дистиллированная вода 1000 мл.

Рабочий раствор готовят перед употреблением, смешивая 25 мл основного раствора азура II, 20 мл основного раствора эозина калия и 55 мл буферного раствора. Пропорции красителей могут несколько варьировать и должны быть установлены опытным путем при приготовлении свежей порции основных растворов красителей.
Фиксированные сухие мазки помещают в контейнер, который опускают в кювету с рабочим раствором красителя и выдерживают в нем строго определенное время, подобранное для каждой партии краски, — от 20 до 45 мин. Затем контейнер переносят в кювету с водопроводной водой. После этого мазки ставят вертикально в штатив для сушки.
При отсутствии штатива-контейнера высушенные мазки можно красить на «рельсах», заливая мазок рабочим раствором красителя возможно более высоким слоем (2—3 мл на мазок).
Окраска по Паппенгейму. Реактивы: 1) эозин метиленовый синий по Май-Грюнвальду (раствор). При отсутствии заводского раствора готовят 5 г/л раствора сухого красителя в метиловом спирте (х. ч.). Раствор готов к употреблению через 4 дня; 2) рабочий раствор азур-эозина по Нохту.
Сухие нефиксированные мазки помещают в контейнер и опускают в кювету с раствором красителя-фиксатора Май-Грюнвальда на 5 мин. Затем контейнер с мазками ополаскивают в кювете с дистиллированной водой и помещают к кювету с рабочим раствором азур-эозина по Нохту на 8—15 мин. Смывают краску, переносят контейнер в кювету с дистиллированной водой. Мазки высушивают на воздухе.
Окраска по Романовскому—Гите. Реактивы: 1) готовый заводской краситель Романовского—Гимзы (азур-эозиновая смесь);

  1. рабочий раствор — 2 капли красителя на 1 мл дистиллированной воды. Готовят его перед употреблением.

Фиксированные мазки в кювете заливают рабочим раствором красителя Романовского—Гимзы и выдерживают 15—30 мин. Затем мазки промывают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. Продолжительность окраски зависит от качества красителя и температуры воздуха. Чем ниже температура воздуха, тем продолжительнее окраска. Выбор оптимального времени окраски проводят всякий раз, когда начинают использовать новый флакон заводского красителя. Хорошо окрашенные мазки имеют розово-фиолетовый цвет, недоокрашенные — розовато-красноватый, перекрашенные — темно-фиолетовый.
Микроскопическое исследование мазков крови. Реактивы: иммерсионное масло; диэтиловый эфир или этиловый спирт.
Оборудование: микроскоп; осветитель для микроскопа; 11-клавишный счетчик для выведения лейкоцитарной формулы; капельница.
Просматривают мазок крови под малым увеличением микроскопа (объектив х 10, окуляр х7). Подсчет лейкоцитов и оценка морфологии эритроцитов допустимы только в тонкой части мазка, где эритроциты лежат одиночно, а не сложены в «монетные столбики».
На край мазка помещают каплю иммерсионного масла, переводят на иммерсионный объектив (х90). Лейкоциты подсчитывают по зигзагу (по линии «Меандра»), отступя 2—3 поля зрения от верхнего края мазка, в начале в 3—5 полях зрения вдоль края мазка, затем в 3—5 полях зрения под прямым углом к середине мазка, потом в 3—5 полях зрения параллельно краю мазка и вновь под углом 90° возвращаются к краю мазка. Такое движение продолжают до тех пор, пока не будет сосчитана половина клеток, необходимая для выведения лейкограммы. Затем переходят на противоположную сторону мазка и подсчитывают вторую половину клеток. Подсчитывают только целые (неразрушенные) клетки.
В норме в крови выявляются лейкоциты следующих форм: базофилы, эозинофилы, нейтрофилы палочкоядерные и сегментоядерные, лимфоциты, моноциты. При наличии в мазках крови плазматических клеток, незрелых, бластных и труднодифференцируемых форм лейкоцитов их также вводят в лейкограмму, описывают их морфологию.
Одновременно с выведением лейкограммы оценивают морфологию лейкоцитов. Если в анализе крови не было выявлено отклонений от нормы количественного состава форменных элементов крови, а при подсчете 100 лейкоцитов не обнаружено никаких отклонений от нормы ни в лейкограмме, ни в морфологии лейкоцитов, то можно ограничиться подсчетом 100 клеток. Если при этом были выявлены какие-либо отклонения от нормы, то необходимо подсчитывать не менее 200 лейкоцитов.
Лейкограмма дает представление только об относительных величинах. Более объективное представление о составе лейкоцитов крови дает вычисление их абсолютного количества, т. е. содержание каждого вида лейкоцитов в определенном объеме крови.
Для подсчета эритроцитов и лейкоцитов крови, их дифферен- цировки можно пользоваться поточными автоматическими гематологическими цитометрами. Эти приборы позволяют определять гематокрит; количество эритроцитов; рассчитать среднее содержание гемоглобина в эритроците, т. е. отношение концентрации гемоглобина (г/л) к числу эритроцитов крови (МСН); среднюю концентрацию гемоглобина в эритроците, т. е. отношение концентрации гемоглобина (г/л) к величине гематокрита (л/л) (МСНС); выделить различные группы клеточных элементов, отличающихся не только по размеру, но и по зернистости. Анализаторы типа БТКБ позволяют подсчитать общее количество лейкоцитов и построить их гистограмму, выделить лимфоциты, моноциты, эозинофилы, гра- нулоциты, а также нетипичные клетки (ядерные эритроциты, сгустки тромбоцитов, лимфобластов, гранулоцитов).
Различные фирмы выпускают автоматические гематологические анализаторы: Н6000, Н1 и Н2 (фирма «Technicon»), STKS («Coulter»), NE 8000 («TOA»), «Sysmex», Cell-Dyn 3000 («Abbott»), Codas Argoss 5DifF («Roche») и др.
Подсчет количества лейкоцитов требует применения в качестве антикоагулянта этилендиаминтетрауксусной кислоты (трилона В), так как гепарин может интерферировать с лизирующими клетками реагента.
Клиническое значение показателей лейко- граммы. Процесс образования, развития и созревания клеток крови (гемопоэз — кроветворение) у человека и животных происходит в костном мозге, селезенке и в лимфатических узлах. В костном мозге образуются эритроциты, тромбоциты, моноциты и зернистые лейкоциты (базофилы, сегментоядерные нейтрофилы); в лимфатических узлах и селезенке — лимфоциты.
При анализе лейкограммы учитывают количество зрелых клеток: базофилов, эозинофилов, палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов. При ряде патологических состояний дают оценку незрелых, молодых форм эритроцитов и лейкоцитов (лимфобластов, промегакариоцитов, мегакариоци- тов, нормобластов, промиелоцитов, миелоцитов, мета-миелоцитов, пролимфоцитов).
Форменные элементы крови здоровых животных различных видов приведены на цветных рисунках I—IV. Нормальные величины количества различных видов лейкоцитов крови у взрослых здоровых животных представлены в таблице 5.
При оценке результатов исследования лейкоцитов учитывают общее их количество, наличие ядерного сдвига нейтрофилов, процентное соотношение лейкоцитов отдельных видов, наличие или отсутствие дегенеративных изменений в клетках.
5. Содержание лейкоцитов в крови здоровых животных различных видов (лейкограмма), %

Вид
животного
Эозино-
филы
Нейтрофилы Лимфо
циты
Моно
циты
Базофилы палочко
ядерные
сегменто
ядерные
Крупный рогатый скот 0,0-2,0 3-8 2-5 20-35 40-75 2-7
Лошадь 0,0-1,0 2-6 3-6 45-62 25-44 2-4
Свинья 0,3-0,8 4-12 3-6 25-35 40-50 2-5
Овца 0,0-1,0 1-4 2-4 40-48 40-50 2-6
Коза 0,0-0,2 2-8 5-20 20-40 40-70 2-5
Собака 0,0-1,0 3-9 1-6 43-72 21-40 1-5
Кошка 0,0-1,0 2-8 3-9 40-45 36-51 1-5
Курица 1,3-3,0 6-10 24-30 52-60 4-10
nbsp; nbsp; nbsp; nbsp; nbsp; nbsp; nbsp;

Появление в лейкограмме молодых и дегенеративных форм нейтрофилов (ядерный сдвиг нейтрофилов) — характерный признак, свойственный инфекционным и воспалительным процессам, злокачественным новообразованиям, различного рода интоксикациям. Различают регенеративный, дегенеративный и лейкемоид- ный ядерные сдвиги. При регенеративном сдвиге увеличивается содержание палочкоядерных и юных нейтрофилов, при дегенеративном — только палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов наряду с дегенеративными изменениями в клетках. Лейкемо- идный сдвиг характеризуется появлением более незрелых форм (миелоцитов, промиелоцитов, миелобластов и др.).
Регенеративный сдвиг наблюдается главным образом при воспалительных и гнойно-септических процессах. Дегенеративный сдвиг — показатель функционального угнетения костного мозга, встречается при интоксикациях (сальмонеллез, острый перитонит, уремическая и диабетическая кома). Лейкемоидные сдвиги являются обычно отражением своеобразной реактивности больного организма при самых различных заболеваниях.
Базофилы — клетки крови диаметром 8—14 мкм, в цитоплазме их имеются крупные базофильные гранулы, содержащие гепарин. Ядро базофилов крупное сегментированное, окрашивается в фиолетово-розовый цвет. Они участвуют в иммунологических реакциях аллергического типа и процессах свертывания крови. В крови встречаются в небольшом количестве.
Увеличение содержания базофилов наблюдается при хроническом миелолейкозе, гипофункции щитовидной железы. Уменьшение содержания базофилов учесть трудно из-за малого их количества в крови.
Эозинофилы — клетки крови размером 8—20 мкм. Отличаются обильной крупной розовой зернистостью, заполняющей всю цитоплазму. Обладают некоторой фагоцитарной и двигательной активностью, участвуют в аллергических реакциях.
Эозинофилия — увеличение содержания эозинофилов. Наблюдают при паразитарных заболеваниях (трихинеллезе, описторхозе, аскаридозе, эхинококкозе и др.), ревматизме, хроническом миелолейкозе, лимфогранулематозе и других злокачественных новообразованиях, ожоговой болезни, обморожении. Появление эозинофилов при воспалительных и гнойно-септических процессах на фоне лимфоцитоза и незначительного ядерного сдвига нейтрофилов является предвестником благоприятного исхода заболевания.
Эозинопения — уменьшение содержания эозинофилов. Отмечают при сепсисе, тяжелых интоксикациях, в агональном состоянии.
Нейтрофилы (палочкоядерные и сегментоядерные) — лейкоцитарные клетки размером 7—15 мкм, обладающие выраженной защитной функцией, связанной с их фагоцитарной и двигательной активностью, способностью вырабатывать бактерицидные (лизо- цим) и антитоксические вещества. Отличительный признак нейтрофилов — мелкая зернистость в цитоплазме. Ядро у молодых клеток не сегментировано и напоминает изогнутую 8-образной формы палочку (палочкоядерные нейтрофилы). В процессе созревания клеток ядро как бы перекручивается, образуя сегменты, соединенные тонкими нитями хроматина (сегментоядерные нейтрофилы). В окрашенных мазках крови цитоплазма нейтрофилов розово-серого цвета (слабооксифильная). Мелкая зернистость в цитоплазме у собак, кошек и свиней окрашивается в розово-фиолетовый цвет, у лошадей и жвачных она воспринимает кислые и основные красители.
Нейтрофилез (нейтрофилия) — увеличение содержания нейтрофилов (палочкоядерных, сегментоядерных). Отмечают при воспалительных процессах (пневмония, перитонит, пиелонефрит, септицемия, плеврит и др.), интоксикациях. Выраженный нейтро- фильный лейкоцитоз с обнаружением молодых форм нейтрофилов, вплоть до промиелоцитов и миелобластов (сдвиг ядра влево), наблюдается при острых пневмониях, тяжелых инфекциях, остром гемолизе. Появление в крови незрелых нейтрофилов (миелоцитов, промиелоцитов, миелобластов) отмечается при миелолейкозе и других злокачественных поражениях (гемобластозах).
Нейтропения — снижение содержания в крови нейтрофилов. Признак падения сопротивляемости организма к инфекциям, воздействия на организм ионизирующей радиации, цитостатических препаратов. Нейтропения обычно совпадает с лейкопенией.
Лимфоциты — клетки крови диаметром от 4,5 до 18 мкм с округлым или овальным ядром, окрашенным в светло-синий или голубой цвет, цитоплазмой с видимым перинуклеарным просветлением (характерный признак). Различают малые, средние и большие лимфоциты. По иммунологическим функциям выделяют Т- и В-лимфоциты.
Лимфоцитоз — увеличение содержания лимфоцитов. Характерный признак хронического лимфолейкоза. Незначительный лимфоцитоз бывает при пневмонии, роже свиней, остеомиелите, сепсисе и некоторых других болезнях и указывает на фазу выздоровления. Лимфоцитоз при агранулоцитозе или лимфатической лейкемоидной реакции — неблагоприятный признак, свидетельствующий о снижении микрофагоцитарной функции организма вследствие истощения гранулопоэза.
Лимфоцитопения — уменьшение содержания лимфоцитов. Встречают при некоторых тяжелых инфекциях, воспалительных и гнойно-септических заболеваниях, и в прогностическом отношении она является неблагоприятным симптомом.
Моноциты — самые крупные клетки (диаметр 10—20 мкм) нормальной крови с круглым ядром бобовидной или подковообразной формы. В патологических случаях ядро может быть сегментировано. Структура ядра нежная сетчатая, в окрашенных мазках бледно-фиолетового цвета, может содержать мелкую зернистость, ва

куоли, зерна пигмента и др. Моноциты фагоцитируют микробные тела, клеточные остатки, различные токсические продукты.
Моноцитоз — увеличение содержания моноцитов. Наблюдают при острых инфекционных заболеваниях, а также при туберкулезе, бруцеллезе, злокачественных опухолях и сепсисе.
Моноцитопения — уменьшение количества моноцитов. Бывает при тяжелых септических процессах и некоторых инфекционных болезнях.
Определение гематокрита с помощью микроцентрифуги. Оборудование: микроцентрифуга МЦГ-8; капиллярные трубки, имеющиеся в комплекте центрифуги (можно использовать капилляры для определения С-реактивного белка). Используют капиллярную или венозную кровь с ЭДТА или гепарином.
Ход определения. При взятии крови непосредственно от животного для предотвращения ее свертывания капилляры обрабатывают антикоагулянтом и высушивают. Если используют кровь с антикоагулянтом, то этого не делают. Заполняют капилляры на 7/8 длины кровью, закупоривают их с одного конца пластилином и помещают в ротор центрифуги так, чтобы закупоренные концы упирались в резиновую прокладку. Центрифугируют 5 мин при 8000 мин *. Определяют гематокритную величину по отсчетной шкале, приложенной к центрифуге.
Определение гематокрита с использованием пипеток Панченкова или градуированных. Оборудование: центрифуга; пипетки Панченкова или другие градуированные микропипетки.
Ход определения. В обработанную антикоагулянтом (или необработанную) пипетку Панченкова с отрезанным верхним концом набирают кровь точно до верхней метки, закупоривают ее, обтягивая резиновым кольцом, и центрифугируют 30 мин при 3000 мин . Для каждой центрифуги устанавливают определенное время работы. Вычитают из 100 высоту столбика эритроцитов и получают гематокритную величину в процентах.
Подобным методом определяют гематокрит в пипетках или пробирках иного типа.
Нормальные величины гематокрита у взрослых животных указаны в приложениях 6 и 7. У молодняка гематокрит ниже, чем у взрослых животных, и имеет некоторую возрастную динамику.
Клиническое значение. Гематокрит — соотношение объема плазмы и форменных элементов крови, выраженное в процентах по объему. Увеличение гематокритной величины отмечают при анемиях и кровопотерях, уменьшение — при сгущении крови. Для объективной оценки лабораторных показателей крови определение гематокрита обязательно.
Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) микрометодом Панченкова. Принцип метода основан на использовании свойств крови, смешанной с раствором цитрата натрия, не свертываться при стоянии, а разделяться на два слоя: нижний — эритроциты и верхний — плазму. Это расслоение происходит с различной скоростью в зависимости от изменения химических и физических свойств крови.
Р е а к т и »: 1,5%-ный раствор натрия цитрата трехзамещен- ного пятиводного. Раствор фильтруют, pH раствора нейтральный или слабощелочной. Реактив нестойкий, при помутнении раствор необходимо заменить.
Оборудование: пробирки размером 10 • 1 см; аппарат Панченкова, состоящий из штатива с гнездами и зажимами для специальных капиллярных пипеток с просветом канала 1 мм. На пипетках нанесена миллиметровая шкала длиной 10 см. Верхнее деление шкалы отмечено «0» и буквой «К» (кровь). Через каждые 10 делений стоят цифры 10, 20, 30 и т. д. до 100; против деления 50 — буква «Р» (реактив). Отверстия концов капиллярных пипеток, вставленных в прибор, герметически закрываются резиновыми прокладками или пробками, и кровь из пипетки не выливается. Капиллярные пипетки и пробирки должны быть хорошо промыты хромовой смесью.
Ход определения. В капиллярную пипетку, предварительно промытую раствором цитрата натрия, набирают этот раствор до метки «Р» и вводят в пробирки размером 10 • 1 см. Затем тем же капилляром набирают 2 раза кровь из ушной вены до метки «К» и вносят ее каждый раз в ту же пробирку. Хорошо смешивают, насасывают в капилляр до метки «0» и, заметив время, ставят в штатив. Через 1 ч отсчитывают по делениям капиллярной пипетки величину оставшегося столбика плазмы.
Расчет. Скорость оседания определяют за 1 ч. Для определения скорости оседания эритроцитов, гематокрита предложено несколько видов устройств. Фирма «Diesse Diagnostica Senese» (Италия) предлагает Vesmatic System — устройство одновременного определения СОЭ в 60 пробах по 1 мкл крови, содержащихся в пластиковых вакуумных пробирках VACUTEG. Фирма «Invitech Ltd» (Англия) выпускает прибор ESRPLUS, который способен определять одновременно в трех пробах капиллярной крови объемом

  1. мкл каждая СОЭ, гематокрит, содержание общего билирубина, а также оценивать наличие липемии и гемолиза. Во всех случаях свежую капиллярную кровь исследуют непосредственно после взятия, венозную стабильную — в течение 12 ч при 2—8 °С.

Клиническое значение. Склеиванию эритроцитов крови препятствует их отрицательный заряд, вследствие чего они отталкиваются друг от друга. Ускорению оседания эритроцитов способствуют глобулины, фибриноген, мукополисахариды, содержание которых увеличивается при многих воспалительных процессах, инфекциях, злокачественных опухолях, нефрите и др.
При вертикальном положении пипетки Панченкова у здоровых животных СОЭ равна (мм/ч): крупный рогатый скот 0,5—1,5; овцы, козы 0,5—1,0; лошади 40—70; свиньи 2—9; собаки 2—6; куры 2—3.
Замедление СОЭ отмечается при диарее (тяжелой форме диспепсии молодняка), обильном потении, полиурии, механической и паренхиматозной желтухах, непроходимостях кишечника. Повышение СОЭ наблюдается при большинстве воспалительных процессов, инфекциях, злокачественных опухолях, коллагенозах, нефрите, анемиях.
Определение гемоглобина крови гемиглобинцианидиым методом. Принцип. Гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием окисляется в метгемоглобин (гемиглобин), образующий с ацетонциангидрином окрашенный гемиглобинцианид, интенсивность окраски которого пропорциональна содержанию гемоглобина. Кровь с антикоагулянтом хранят в течение 24 ч при

  1. 8 “С, 8 ч при комнатной температуре — 15—20 °С.

Реактивы: заводской набор реактивов;
трансформирующий раствор (ацетонциангидрин 0,5 мл, калий железосинеродистый 200 мг, натрий двууглекислый 1 г, дистиллированная вода до 1л); стабилен при хранении в посуде из темного стекла в течение 3 мес, при появлении осадка или обесцвечивании раствор к употреблению не пригоден;
стандартный раствор гемиглобинцианида, соответствующий концентрации гемоглобина крови 15 г% при разведении крови в 251 раз.
Оборудование: фотоэлектроколориметр; пипетки на 0,02 мл; колба мерная на 1 л.
Ход определения. В пробирку вносят 5 мл трансформирующего раствора и 0,02 мл крови (разведение в 251 раз), хорошо перемешивают, оставляют на 10 мин, после чего смесь измеряют на фотоэлектроколориметре при длине волны 500—560 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 1 см против холостой пробы (трансформирующий раствор). Стандартный раствор измеряют при тех же условиях, что и опытную пробу.
Расчет гемоглобина (г%)проводят по формуле НЬ = Еоп/Ест х 15,
где ?0п — экстинкция опытной пробы; ^ет — экстинкция стандартного раствора; 15 — соответствие стандартного раствора концентрации гемоглобина крови при ее разведении в 251 раз.
Для перевода г% в г/л найденное число умножают на 10.
Метод Сали, предложенный еще в 1895 г., неточен и им в настоящее время пользоваться не рекомендуется.
Определение гемоглобина в крови возможно с помощью бумажных полосок, помещенных на пластиковых подложках в отражательные фотометры, выпускаемых фирмами «Эймс» (США) и др. Исследуемую пробу наносят на реакционную зону диагностической полоски и помещают в прибор, в котором она облучается полихроматическим светом, диффузионно отраженный свет собирается на измерительной системе и после прохождения через интерферирую

щий фильтр измеряется, затем его сравнивают со стандартом. Система контролируется микропроцессором.
Клиническое значение. Гемоглобин — дыхательный пигмент крови, состоит из белка глобина и простетической группы — гема. Глобин по строению близок к альбумину, синтезируется в печени, представляет хелатный комплекс протопарферина с двухвалентным железом.
Основная функция гемоглобина — перенос кислорода от легких к тканям. Гемоглобин участвует в транспорте углекислого газа из тканей в легкие, в поддержании кислотно-основного равновесия в организме, т. е. обладает буферными свойствами. Он способен соединяться с оксидом углерода, образуя карбоксигемоглобин, а также с некоторыми химическими веществами с образованием метге- моглобина. Эти соединения не способны переносить кислород от легких к тканям.
Нормативы содержания гемоглобина у животных приведены в приложениях 5—7.
Снижение количества гемоглобина отмечается при дефицитных анемиях вследствие недостатка железа, меди, кобальта, витамина В12, фолиевой кислоты, белков и других веществ, при хронических интоксикациях, гепатите, гепатозе и других болезнях печени, кето- зе, расстройствах желудочно-кишечного тракта, инфекционных и инвазионных болезнях и других заболеваниях. Умеренное снижение гемоглобина отмечают при алиментарной (железодефицитной) анемии, более выраженное — при массовой кровопотере, гемолитической и гипопластической анемии.
Следует отметить, что снижение концентрации гемоглобина и количества эритроцитов не всегда протекает параллельно. Чаще количество гемоглобина уменьшается резче, чем число эритроцитов в крови. Однако при ряде заболеваний могут возникать противоположные сдвиги, поэтому необходимо одновременно определять цветовой показатель.
Повышение уровня гемоглобина отмечают при сгущении крови (диарея, обильное потоотделение), непроходимости кишечника, сильной мышечной нагрузке, нахождении животных на высоте 1400 м и выше над уровнем моря.
Определение цветового (цветного) показателя. Цветовой показатель — среднее содержание гемоглобина в одном эритроците. Он характеризует степень насыщения эритроцитов гемоглобином по сравнению с нормой. Цветовой показатель вычисляют путем деления концентрации гемоглобина в 1 мкл крови, выраженной в пикограммах (пк), на число эритроцитов в том же объеме крови.
Цветовой показатель определяют по формуле
х = ЗНв (г/л)
Три первые цифры количества эритроцитов в 1 мкл’
Например, в 1 мкл крови содержится 4 500 ООО эритроцитов, концентрация гемоглобина 120 г/л. В этом случае цветовой показатель будет равен 3 • 120/450 = 0,8.
В норме цветовой показатель равен 1 или близок к ней. Снижение его до 0,8 и ниже (гипохромия) свидетельствует о слабом насыщении эритроцитов гемоглобином, что отмечается при железодефицитной анемии. Увеличение цветового показателя выше 1 (гиперхромия) отмечается при В^- и фолиеводефицитных, ги- попластических анемиях. При острых кровотечениях, хронических лейкозах, некоторых гемолитических анемиях отмечается нор- мохромная анемия, при которой цветовой показатель близок к 1.

    источник

    Наиболее информативной лабораторной диагностикой состояния организма человека являются анализы крови. Они применяются практически во всех областях медицины при диагностировании многих заболеваний, проведении профилактических осмотров, контроле проводимой терапии. Какие же методы анализа крови используются при этом? Конечно, рассмотреть все существующие методы исследования крови достаточно трудно, так как их существует очень много. Поэтому, рассмотрим методики проведения исследований наиболее часто встречающихся анализов крови.

    Общий анализ крови дает возможность врачу оценить общее состояние здоровья человека, определить наличие воспалительного процесса, инфекционных и паразитарных заболеваний, патологий кроветворения в организме. В ходе его проведения определяют много показателей, изменения значений которых могут указывать на те или иные проблемы со здоровьем.

    Основным методом общего анализа крови является микроскопическое исследование. В ходе его проведения врач-лаборант производит подсчет клеток крови (лейкоцитов, эритроцитов, тромбоцитов) и оценивает их форму. Объект анализа при данном методе – высушенный и окрашенный мазок крови. Микроскопическое исследование имеет большую диагностическую ценность. В то же время, если рассматривать каплю крови, то информационность микроскопии значительно увеличивается. Причиной высушивания мазка, при котором деформируются клетки крови, является содержание кровяными клетками большого количества воды. Вода слабо поглощает свет, в результате чего клетки становятся прозрачными под микроскопом.

    Дает возможность увидеть живые кровяные клетки. Метод основан на регистрации разницы изменения фазы проходящих лучей света клетками крови. С помощью метода фазо-контрастной микроскопии можно получить четкое контрастное изображение структуры клеток крови, наблюдать особенности их поведения, выявлять в плазме крови кристаллы многих соединений и живые клетки микроорганизмов. Данный метод анализа крови дает возможность оценить поведение эритроцитов (их подвижность, способность объединяться), рассмотреть процесс агрегации (объединения) тромбоцитов. Кроме того, при таком методе исследования в плазме крови обнаруживают клетки бактерий, грибов, включения, которых не должно быть в норме, например, кристаллы мочевой кислоты или холестерина.

    Биохимический анализ крови (биохимия крови) назначается с целью оценки состояния отдельных органов, систем и тканей организма, определения дефицита витаминов и микроэлементов. Чаще всего его применяют в диагностике заболеваний печени, почек, пищеварительной системы, сердечно-сосудистой системы.

    В биохимическом анализе крови можно исследовать больше 40 показателей. В каждом конкретном случае врач назначает пациенту, какие именно показатели биохимии крови необходимо исследовать.

    Основными методами биохимического анализа крови являются биохимические реакции. После проведения необходимой реакции кровь исследуют с помощью специальной аппаратуры, например, фотоэлектроколориметра. Для проведения расчетов часто используют построение специальных калибровочных графиков. Во время исследования биохимии крови применяются химические реактивы, необходимые приборы.

    Специфика методов биохимического анализа крови требует точного соблюдения этапов проведения химических реакций, профессионализма врачей-лаборантов.

    Иммуноферментный анализ (ИФА) крови – это лабораторное определение в крови антител и антигенов. Данный метод анализа бывает качественным (показывает отсутствие или наличие антигенов и антител) или количественным (определяет количество антител или антигенов).

    На чем же основан данный метод анализа крови? В случае попадания в организм человека чужеродных микроорганизмов (антигенов) его иммунная система начинает вырабатывать к ним антитела (иммуноглобулины). Это специфические белки, которые имеют способность связываться с определенным антигеном, образовывая комплекс антиген-антитело. Такой комплекс во время проведения ИФА метода анализа крови определяют качественно и количественно.

    В расшифровке анализа крови методом ИФА различают антитела трех классов – иммуноглобулины IgA, IgM и IgG. Они появляются в крови в разные промежутки времени от момента инфицирования.

    Иммуноглобулины IgM появляются в крови самыми первыми, примерно на пятые сутки после начала болезни. Определить антитела этого класса можно в течение 5-8 недель с момента инфицирования, после чего они исчезают. Также иммуноглобулины класса IgM часто вырабатываются в период обострения хронического заболевания.

    Иммуноглобулины класса IgG можно выявить ИФА методом анализа крови через 3-4 недели от попадания инфекции в организм. После этого они могут оставаться в крови на протяжении нескольких месяцев или лет. Если две пробы, последовательно взятые через две недели, показывают повышение количества иммуноглобулинов IgG, можно говорить о текущем инфекционном заболевании или реинфекции (повторное инфицирование той же инфекцией после выздоровления). Данный класс антител обеспечивает иммунитет после вакцинации или перенесенной болезни.

    Согласно расшифровке анализа крови методом ИФА через 2-4 недели после заражения или обострения болезни в крови определяются иммуноглобулины класса IgA. Большее количество данных антител находится в секрете слизистых оболочек, а около 20% их циркулирует в крови человека. Исчезают иммуноглобулины IgA из кровотока через 2-8 недель после излечения. Их исчезновение является критерием выздоровления. В случае, когда после окончания болезни ИФА метод анализа крови выявил наличие антител класса IgA, говорят о хроническом течении инфекционного заболевания.

    Приведем расшифровку анализа крови методом ИФА, в которой (+) означает положительный результат, (-) означает отрицательный результат.

    • IgA (-), IgM (-), IgG (-) – иммунитет к инфекции отсутствует.
    • IgA (-), IgM (-), IgG (+) – наличие постинфекционного или поствакцинального иммунитета.
    • IgA (+), IgM (+), IgG (+) – острая инфекция.
    • IgA (-), IgM (+), IgG (-) – острая инфекция.
    • IgA (+), IgM (+), IgG (+) – хроническая инфекция в стадии обострения.
    • IgM (-) – выздоровление.

    ИФА метод анализа крови дает возможность определять не только содержание отдельных белков (антител, гормонов, ферментов), но также их взаимодействие. Кроме того, с помощью данного метода исследования крови можно определять специфичность нужных антител, следить за их образованием, идентифицировать белки. Все это дает возможность врачу не только диагностировать заболевание, но и следить за процессом его протекания, контролировать эффективность проводимой терапии.

    Метод ИФА активно применяют в диагностике вирусов: возбудителей гриппа и парагриппа, аденовируса, энтеровируса, риновируса, метапневмовируса, коронавируса.

    источник



    Источник: art-mylife.ru


    Добавить комментарий